ГОСТ Р ИСО 10993-10—2009
При исследовании экстрактов также используют не менее 10 животных для каждого экстракта, и
не менее пяти морских свинок составляют контрольную группудля каждого раствора. Для проведения
предварительных исследований используют дополнительное число животных.
Если испытание на 10 опытных и пяти контрольных животных полностью отрицательное, малове
роятно. что дальнейшее испытание на 10 опытных и пяти контрольных животных даст положительные
результаты. Однако, если проявятся какие-нибудь сомнительные реакции, перепроверка должна быть
выполнена (см. 7.4.6). Если сомнительные реакции остаются, проводят новое исследование на мини
мум 20 опытных и 10 контрольных животных.
7.4.4Проведение исследования
7.4.4.1 Подготовка
Шерсть на подопытных участках кожи тщательно выстригают до начала исследования.
Доза, вводимая внутрикожно в каждый исследуемый участок, составляет 0.1 мл.
Для аппликаций пропитывают испытуемой пробой фильтровальную бумагу или гигроскопичную
марлевую подушечку (4—8 см2), которые прикладывают на выстриженные участки кожи и фиксируют
окклюзионной повязкой вокруг тела животного.
7.4.4.2 Предварительные испытания
Предварительные испытания предназначены для того, чтобы определить концентрацию испыту
емой пробы, которая будет использоваться в основном исследовании, см. 7.4.4.3.
Неразведанные экстракты при использовании известных растворителей не нуждаются в предва
рительном испытании.
Должно быть рассмотрено возможное влияние введения полного адъюванта Фрейнда (FCA) в
сочетании с испытуемым материалом во время основного теста и. таким образом, возможное искаже
ние результатов.
Согласно применению испытывают крайние разведения на трех животных.
Через 24 ч снимают повязку иобразцы иоценивают состояние опытных участков на наличие эри
темы и отека в соответствии с таблицей 4 (по классификации Magnusson и Kligman).
Для индукционной фазы в основном тесте выбирают самую высокую концентрацию, которая не
вызывает более чем очень слабую эритему, и не оказывает общего отрицательного воздействия на
животных.
Т а б л и ц а 4 — Система классификации реакции кожи
Описание ответной реакцииБаллы
Нет видимых изменений0
Дискретная или очаговая эритема1
Умеренная и сплошная эритема2
Интенсивная эритема и припухлость3
7.4.4.3 Основной тест
7.4.4.3.1 Внутрикожная индукционная фаза
Каждому животному в выстриженные участки кожи (А, б и С) в соответствии с рисунком 2 прово
дят парные внутрикожные инъекции в объеме 0.1 мл.
А: Смесь полного адъюванта Фрейнда с выбранным растворителем в соотношении V7V= 50/50.
Необходимо использовать физиологический солевой раствор (в соответствии с Британской Фармако
пеей. Фармакопеей США или эквивалентный) для водорастворимых материалов.
В: Испытуемый образец (неразведенный экстракт); контрольным животным вводят только рас
творитель.
С: Испытуемый образец в концентрации, выбранной для участка В, эмульгированный с полным
адъювантом Фрейнда в соотношении V/V = 50/50 и растворителем (50 %); контрольным животным вво
дят только эмульсию контрольного раствора с адъювантом.
13