ГОСТ Р ИСО 15883-1 — 2008
Для испытания внутренних поверхностей, например, каналов минимально инвазионных хирургических ин
струментов. зажмите кстойке инструмент так. что его отдаленныйот центра конец стоит на основании химического
стакана. Присоедините одноразовый шприц к другому концу канала инструмента, используя отрезки силиконовой
трубки. После добавления 5 см11%-ного раствора SDS в каждый химический стакан, промойте каждый световой
канал несколько раз путем всасывания раствора и опустошения шприца.
Для приготовления раствора реактива ОРА растворите 40 мг о-фталиевого диапьдегида в 1см3 мл метано
ла. затем добавьте 50 см30.1
М
двунатриевого тетраборатного буфера
(pH 9.3).
100 мг Л/.Л/-диметип-2-меркапто-
эгил- аммониевого хлорида и 1.25 см3 водного 20%-ного (массовая фракция) раствора SDS.
Перед каждым измерением однолучевым спектрофотометром делайте регулирование нуля с 1 см3 раство
ра реактива ОРА в кварцевой кюветке. Если используетсяспектрофотометр, генерирующийдва луча, то поместите
кюветку с раствором реактива ОРА во второй луч в качестве опорного нуля на протяжении испытания.
Для определения протеина добавьте 100 см3 згиоата 1%-ного раствора SDS к 1 см3свежеприготовленного
раствора реактива ОРА в кюветке. Закройте кюветку колпачком и тщательно перемешайте растворы путем взбал
тывания.
Определите затухание через 3 мин.
Любая турбулентность элюата SDS или отпечаток пальца на колпачке кюветки приведут к неверному резуль
тату. Пластиковые материалы следует тестировать для определения, что они не выделяют пластификаторы,
которые влияют на реакцию ОРА.
Значение затухания менее 0.020 является показателем низкого уровня протеиназного остаточного загряз
нения.
Проведите позитивный и негативный контроль для каждой серии выполненных тестов.
Остаточное загрязнение может быть выражено в микромолях аминогрупп, чувствительных к ОРА. из расче
та на 1 см3и 5 см3 1%-ного SDS раствора, использованного для выборки. Для вычисления этого значения, можно
использовать 6.42 л/ммоль/см как коэффициент поглощения, т. е. 0.1 микромоль аминогрупп, чувствительных к
ОРА. дают затухание 0.642.
В вычислениях присутствующего остаточного загрязнения следует принимать во внимание коэффициент
разбавления.
С.2.4 Приемочные критерии
При испытаниях в соответствии с С.2.3 значение затухания должно быть менее 0.020.
С.2.5 Аспекты безопасности
Должна применяться информация, предоставляемая производителем химикатов, например, в справоч
ном листе по безопасности, а также необходимо носить подходящие средства индивидуальной защиты.
С.З Полуколичественный белковый анализ, используя биуретный метод
С.3.1 Общие положения
Биурет как метод бицинхониновой кислоты (ВСА) подходит для определения протеинов, содержащих не
менее двух пептидных связей (СО —
NH).
В щелочном растворе со специфическим показателем
pH
атомы азота (N)
пептидной цепочки сопрягаются с ионами меди, снижая Си2* до Си1*. Затем Си1* образует интенсивную
фиолетовую окраску с бицинхониновой кислотой. Интенсивность окраски зависит от количества присутствующего
протеина. Если протеин не присутствует, то реактив ВСА превращается из голубого в яблочную зелень, которая
является комплексом ВСА и Си2*. Для справки смотрите (22) и [23].
Биуретный метод может быть использован как полуколичественный метод для определения остатков про
теина на медицинских устройствах, которые прошли обработку в МД машине.
П р и м е ч а н и е — Тестовые комплекты, использующие этот биуретный/ВСА метод, или модифицирован
ная обратная реакция, которая дает равные результаты, являются доступными для приобретения.
С.3.2 Оборудование и материалы
Оборудование и материалы должны включать в себя:
- химикаты: бицинхониновую кислоту, карбонат натрия, тартрат натрия, гидроокись натрия, водородный
карбонат натрия, пентагидрат сульфата меди, додецилсульфат натрия (SDS);
- раствор А. состоящий из водного 1%-ного раствора BCA-Naz. 2%-ного моногидрата карбоната натрия,
0,16%-ного татрата натрия. 0.4%-ного гидроокиси натрия и 0.95%-ного водородного карбоната натрия ч;
- раствор А. состоящий из 4%-ного пенталгидрата сульфата меди вдеионизированной воде;
- пробирки:
- подставкудля пробирок;
- защитные перчатки, свободные от протеина:
- тампоны и/или пластиковый мешок, которые не загрязнены протеином:
- градуированные пипетки на 1 см3 и 10 см3;
- защитные перчатки, предохраняющие от загрязнения.
1) Подходящие химикаты доступны для приобретения у фирмы Merck and Aldrich. Эта информация дается
для удобства пользователей настоящего стандарта и не служит одобрением этих продуктов со стороны ИСО.
Могут быть использованы эквивалентные продукты, если они могут показать такие же результаты.
49