ГОСТ Р 57221—2016
Экстракт дрожжевой.
Инокулят инфузории (3—4-суточная культура инфузории).
Триптон бактериологический фирм «Ферак», «Дифко» или пептон сухой ферментативный для
бактериологических целей — по ГОСТ 13805.
Среда УСД для определения токсичности (углеводно-солевая дрожжевая); готовят следующим
образом, в мерную мензурку вносят 1,5 г Д-глюкозы или кристаллической гидратной глюкозы. 0.1 г
дрожжевого экстракта. 0,1 г морской соли и доливают дистиллированной водой до 100 см3, устанавли
вают pH 7.1—7.2. среду разливают в конические колбы по 10 см3, закрывают ватно-марлевыми пробка ми
и стерилизуют в автоклаве 15—20 мин. при 760 мм рт. ст.
Среда триптонная или пептонная (для поддержания инокулята инфузории); готовят следующим
образом: в мерную мензурку вносят 2,0 г сухого ферментативного пептона для бактериологических
целей или бактериологического триптона. 0,5 г Д-глюкозы или гидратной глюкозы. 0.1 г дрожжевого
экстракта, 0.1 г морской соли и доводят объем дистиллированной водой до 100 см3, устанавливают
pH 7,1—7,2. среду разливают в конические или плоскодонные колбы вместимостью 100 см3 по 10 см3,
закрывают ватно-марлевыми пробками и стерилизуют в автоклаве 15—20 мин. при 760 мм рт. ст.; среду
хранят в течение месяца при температуре 4 °С.
22.2 Подготовка к испытанию
22.2.1 Культивирование инфузорий
Пересевают 0.2 см3 среды с культурой на свежую триптонную или пептонную среду. Пересев про
водят каждые семь дней. Раз в месяц проводят бактериологический контроль среды на стерильность
путем посева на мясо-пептонный агар.
22.2.2 Приготовление фосфатного буфера pH 7,4
В мерную колбу вместимостью 200 см3берут 81 см30.2 моль/дм3 (0,2 н.) раствора фосфорнокис
лого натрия двузамещенного и 19 см30.1 моль/дм3 фосфорнокислого натрия однозамещенного. объем
доводят дистиллированной водой до 200 см3.
22.2.3 Расчет массы навески продукта
Массу навесок продукта (т) в граммах, соответствующую заданным количествам (концентраци
ям) азота: 3. 6.10,15 и 20 мг. вычисляют по формуле:
т -
А 100
N’
(16)
где А— заданные количества (концентрации) азота в навеске продукта, мг:
100 — коэффициент пересчета содержания азота в 100 г продукта.
N— массовая доля азота в продукте. %.
22.3 Проведение испытания
Соответствующие навески переносят в конические колбы со средой УСД. Проверяют pH среды.
pH не должно резко меняться. Если pH снижается до 5 и ниже, среду готовят, используя вместо дис
тиллированной воды фосфатный буфер pH 7.4. Затем засевают 0,2 см3 инокулята 3—4-суточиой ин
фузории и полученные пробы инкубируют в термостате при температуре 24— 26 X в течение 72 ч. Для
лучшей аэрации колбы 2—3 раза в сутки встряхивают.
В качестве контроля за состоянием культуры используют казеин в заданных концентрациях азота:
3,6.10,15 и 20 мг.
22.4 Обработка результатов
Культуру инфузории в исследуемых пробах просматривают в капле на предметном стекле (ка
плю берут стеклянной палочкой или пастеровской пипеткой) под микроскопом (объектив 10, окуляр 7)
в 5—6 полях зрения через 72 ч.
В случае гибели инфузории в течение учетного времени хотя бы водной из концентраций или на
личия единичных (до 5) клеток в поле зрения при одновременном снижении активности тест-культуры в
двух последних концентрациях и получения аналогичного результата в повторном эксперименте с
предварительным кипячением сроды УСД с навесками в колбах в течение 10 мин. на водяной бане
продукт считается токсичным. Если в опыте без кипячения токсичность выявлена, но в повторном
44