ГОСТ Р 57221—2016
Добавляют 1 см3 20-процентного раствора мочевины, тщательно перемешивают. Разливают впробирки по
7 см3 и стерилизуют при температуре 112 аС 20 мин. или текучим паром 30 мин.
Допускается приготавливать среду без добавления мочевины, но в этом случае в расплавленную
после стерилизации среду в пробирке вносят в асептических условиях 0.1 см3 стерильного раствора
мочевины.
21.2.6 Приготовление полужидкого агара
Агар питательный сухой................................
..
................................
..
...............................3.0 г
Вода дистиллированная...................................................................................................1000 см3
Среду разливают в пробирки по 5 см3 и стерилизуют при температуре 120 °С в течение 30 мин.
21.2.7 Приготовление индикаторной бумаги для обнаружения индола
Листы фильтровальной бумаги размером 20 * 30 см обильно смачивают горячим 60—70 “С на
сыщенным раствором щавелевой кислоты с массовой долей 12 %. сушат при температуре (23 ♦ 2) °С,
нарезают полосками шириной 0,2—0.4 см. длиной 5—6 см и хранят в банках из темного стекла с проб
ками.
21.3 Проведение испытания
Навеску продукта массой 50 г. взятую с соблюдением правил асептики, переносят в асептических
условиях в колбу с 350 см3 среды предобогашения на основе пептона (п. 21.2.16) или ферментолизата (п.
21.2.1
b
). Посев инкубируют при температуре 37 °С в течение 16—20 ч. После инкубирования сте
рильно переносят 20 см3 культуральной жидкости в колбу с 200 см3 магниевой среды на основе пепто на
или ферментолизата. Посев инкубируют при температуре 37 X в течение 48 ч.
Через 18—24 чтермостатирования из колбыс магниевой средой производят посевы бактериологиче
ской петлей на чашки с твердымидифференциально-диагностическими средами: висмут-сульфит агаром и
по выборусо средой Плоскирева или Левина (по две чашки) для получения изолированных колоний.
На висмут-сульфит агаре S. typhi и S. paratyphi А. растут в виде мелких, нежных, серовато-зеле
ных колоний с черным центром. S. cholerae suis — в виде зеленых колоний. Колонии почти всех других
сальмонелл значительно крупнее, темно-коричневого цвета с металлическим блеском, окруженные ме
таллическим или светлым ореолом, цвет участка среды под колонией — черный.
На среде Плоскирева сальмонеллы растут в виде прозрачных или нежно-розовых колоний, на
среде Левина — в виде прозрачных, бледных нежно-розовых и розовато-фиолетовых колоний.
В случае обнаружения колоний, подозрительных на сальмонеллы. 3—6 из них отвивают по 1/3
колонии на одну из сред: КДСМ. Олькеницкого или Клиглера. Для определения подвижности проводят
посев уколом исследуемой колонии в полужидкий агар. Оставшуюся часть колонии отвивают на косяк
Симмонса для проверки ассимиляции цитрата и в МПБ или пептонную воду для проверки индоло-
образования. вкладывая под пробку индикаторную бумагу на индол. Бумагу помещают таким образом,
чтобы она удерживалась пробкой, но не прикасалась к среде. При наличии индола через 1—3 дня
термостатирования при 37 еС нижняя часть бумажки окрашивается в розовый цвет, хорошо заметный в
проходящем свете.
Посевы на комбинированные среды КДСМ. Олькеницкого или Клиглера делают сначала штрихом
на скошенную поверхность, а затем уколом в глубину столбика, посев на сроду Симмонса — штрихом.
Посевы инкубируют при температуре 37 °С 18—24 ч.
Культуры сальмонелл ассимилируют и сбраживают глюкозу, не ассимилируют лактозу, образуют
сероводород, не разлагают мочевину, утилизируют цитраты, не образуют индол.
При росте сальмонелл цвет скошенной поверхности всех трех комбинированных сред не меняет
ся (лактозу не ассимилируют) или слегка розовеет. При ассимиляции глюкозы растущей культурой стол
бик среды КДСМ приобретает голубовато-зеленый цвет, столбик среды Олькеницкого окрашивается в
оранжево-розовый цвет, среды Клиглера — в желтый. Вследствие образования газа при ферментации
глюкозы происходит разрыв столбика агара со скоплением в нем пузырьков газа у большинства культур
сальмонелл. При росте штаммов, образующих сероводород, на границе скошенной поверхности сре
ды и столбика или на дне пробирки происходит почернение среды. Некоторые культуры
продуцируют сероводород замедленно либо не продуцируют его (S. Paratyphi A.. S. cholerae suis. S.
bareilly. S. typhi suis. S. pullorum).
При разложении мочевины среда КДСМ меняет цвет скошенной части и столбика на ярко-оран
жевый. При этом учет ферментации глюкозы и лактозы становится невозможным. Среда Олькеницкого
при разложении мочевины остается розовой.
42