ГОСТ ISO 10993-10—2011
Научной базой для исследования является измерение введенного ЗН-метил-тимидина в лимфоциты в дрениру
емых лимфоузлах мыши под местным воздействием испытуемого образца как показатель сенсибилизации. Это иссле
дование не включает провокационную фазу. Конечной интересующей точкой является индекс стимуляции, означающий
соотношение введенного тимидина в лимфоузлы животных, получивших дозу воздействия, с введенным в лимфоузлы
контрольной группы. Исследование является положительным, когда индекс стимуляции превышает 3 (SI > 3). Внутри и
межлабораторная оценки LLNA показали воспроизводимое соотношение доза — ответ внутри и между лабораториями
[60]. [76]. [78], [72]. [59]. [65]. [82]. Тем не менее, сообщалось о трудностях в различии между раздражающими и аллерген
ными веществами при использовании LLNA[72]. [62], [79]. Таким образом. LLNA может производитьложно положительные
результаты с раздражителями и может переоценить аллергенность веществ, имеющих и раздражающие, и аллергенные
свойства [59]. Тем не менее, у LLNA есть преимущества посравнению с пробами на морских свинках по причине более ко
роткой продолжительности исследования, более объективной конечной точки, меньшего объема требуемого испытуемого
вещества, а также это исследование не включает инъекции полного адъюванта Фрейнда. Возможны усовершенствования
методики исследования путем использования анализа маркеров активации клеток и цитометрии потока [68]. [69]. Не уста
новлено. могут ли они быть внедрены на практике в стандартные протоколы LLNA для обычной токсикологии. С другой
стороны. LLNA ограничивает выбор тестовых растворителей: в большинстве исследований использовалась смесь ацето на
и оливкового масла. Недавнее исследование демонстрирует вариабельность результатов с использованием разных
растворителей [77]. Кроме того, при использовании LLNA невозможно изучать провокационную фазу или конфигурации
перекрестной реактивности, так как животные умерщвляются после индукции до забора лимфоузлов.
Проба подколенного лимфоузла (PLNA), использующая подкожное введение в подушечку стопы [63]. [66],
[81]. является альтернативой пробе на лимфоузле. В данной пробе, кроме прямого измерения активации лимфо
узла. возможно использование антигенов-релортеров для дальнейшего прояснения иммуномодуляции, вызванной
исследуемым химикатом [58].
Процесс оценки риска не должен полагаться на единственную модель или подход: его проведение должно
быть продуманно для предоставления максимальной гарантии безопасности потребителю. Как правило, это тре
бует исследований на животных моделях и человеческих экспериментальных моделях. Требуется определенная
гибкость при выборе моделей и методов при наличии соответствующей документации и.’или обоснования выбора.
Отрицательный ответ, полученный на морских свинках, при надлежащем проведении, может быть опреде
ляющим. если исследуемая концентрация имеет достаточный фактор безопасности при условиях использования.
Тем не менее, необходимо избегать классификации исследуемых материалов исключительно на основании веро
ятности т’или тяжести, без должного учета использования этого продукта в будущем.
Риск. т.е. вероятность и тяжесть аллергической реакции на продукт, определяется, в основном, следующими
четырьмя факторами: сенсибилизирующий потенциал химического аллергена, его число в продукте, биодоступ
ность и условия воздействия. Относительный сенсибилизирующий потенциал химических веществ может быть
определен минимальной индукционной концентрацией, необходимой для стимуляции данного уровня сенсиби
лизации: чем меньше эта концентрация, тем выше потенциал аллергена [80], [40]. Было продемонстрировано,
что значительное число случаев аллергического контактного дерматита обнаруживалась у потребителей, когда
остаточный уровень аллергена в продукте превышал его минимальную индукционную концентрацию, полученную
путем GPMT [51].
С другой стороны, прогнозирующее исследование смесей и продуктов гораздо менее обоснованно и может
проводиться после исследования ингредиентов продукта. Соответственно, план исследования и интерпретация
результатов могут быть неопределенными, несколько примеров подтверждают и отражают эту возможность. В
исследованиях на животных с экстрактами ацетона из свитера, вызвавшего контактный дерматит у людей, были
выявлены аллергены (хлорофенилгидразоны фосгена) [48]. В другом случае, исследования на животных с экс
трактами ацетона’хлороформа из резиновых сапог, вызвавших контактный дерматит у человека, в результате были
выявлены каузативные аллергены меркаптобенэогиазол и дибенэотиазилдисупъфид [47]. Была ясно продемон
стрирована необходимость использования надлежащего органического растворителя. Экстракты, подготовленные с
органическим растворителем, вызвали гилврчувствительность на морских свинках, в то время как экстракты с
солевым раствором не вызвали такой реакции.
Японское руководство основных биологических исследований медицинских материалов и изделий (1995) при
нимает процедуру приготовления пробы с органическим растворителем, с последующим выпариванием до получе
ния осадка, а также процедуру оценки риска путем сравнения процента выхода осадка из материала с минимальным
процентным раствором осадка (смесью) для индукции гиперчувствительности замедленного типа на животных.
In vitro методы для исследования кожной сенсибилизации на данный момент не доступны для стандартного
использования [13].
34