ГОСТ ISO 10993-10—2011
щественныы по отношению к коже и обладал проникающей способностью. Затем он вступает в реахцию с белками
кожи для формирования иммуногенных комплексов. Клетки
Л
ангертанса на эпидермальнойУдермальной границе
вырабатывают антиген на специфические лимфоциты, которые затем активируются для инициации иммунных от
ветов. Небольшой процент этих лимфоцитов является клетками долгосрочной памяти, которые служат основными
активаторами в провокационной фазе. Таким образом, последующие повторные воздействия могут привести к не
гативным реакциям, которые сопровождаются выбросом лимфохинов активированными лимфоцитами и другими
воспалительными клетками, привлеченными в зону раны.
В 1895 Jadassohn, используя метод аппликаций, обнаружил у пациента клинически контактную аллергию
на ртуть. Этот новаторский подход предоставил научную базу для последующих исследований, направленных на
диагноз и прогноз контактной аллергии у человека и животных. Развитие перспективных/прогнозирующих
иссле дованийдля оценки сенсибилизирующего потенциала химикатов последовало за новаторской работой
Landsteiner и Chase [49]. которые твердо обосновали использование морских свинок для изучения
гиперчувствительности за медленного типа.
Magnusson и Kligman [50] опробовали множество вариантов исследований на морских свинках и предло
жили процедуру максимизации на морских свинках (GPMT). основанную на внутрикожных иньекциях (с полным
адъювантом Фрейнда [FCA] или без него) и последующих местных аппликациях исследуемого материала на тот
же участок. Предложенная методика требует предварительной обработки испытуемого участка, если исследуемый
материал не является раздражителем. Как правило она достоверно обнаруживает слабые сенсибилизаторы, так
как понятие «слабый» включает нулевую вероятность положительных реакций. Этот чувствительный метод широ ко
используется. Применение полного адъюванта Фрейнда повышает чувствительность метода исследования и, в
некоторых случаях, может переоценить сенсибилизирующий потенциал испытуемого соединения.
В 1965 Buehler [41] предложил использование закрытых аппликаций для обеспечения окклюзии как метод
для оптимизации воздействия и приближения к условиям процедур, используемых на человеке (Human Repeat
Insult Patch Test HRIPT). Высказывалось предположение, что методика окклюзивной аппликации является чув
ствительной и точно пропюзирует средние и сильные сенсибилизаторы, таким образом, предотвращая вероят
ность негативных реакций у человеческих моделей при повторной накожной пробе (Human Repeat Insult Patch Test.
HRIPT). Представленные данные показали преимущества окклюзии по сравнению с внутрикожными иньекциями и
местным применением открытого типа. Стимуляция иммунной системы адьювантами не использовалась. Данный
метод признан достаточно чувствительной процедурой для определения самых слабых сенсибилизаторов и до
казан как достаточно гибкий для использования в процедуре оценки риска. Тем не менее, исследование закрытой
аппликацией (исследование Бюлера) менее чувствительно по сравнению с GPMT [46].
Эти два исследования, метод закрытой аппликации и максимизации наиболее часто использовались для
оценки безопасности в Соединенных Штатах Америки и в Европе. Они также являются предпочтительными мето
дами исследованиями в действующих Руководствах по исследованиям OECD и ЕС. Результаты сенсибилизирую
щих проб на морских свинках зависят от многих факторов, связанных с животными и с техническими аспектами, что
объясняет различия 8 результатах исследований разных лабораторий, например, линия животных, их пол.
возраст, окружающие условия исследования, исследуемый участок на животном, метод удаления шерсти (стрижка/
бритье) или химическая депиляция, тип конфигурации аппликации, число исследуемого материала, качество ок
клюзии. время воздействия и считывание тканевого ответа. Были использованы и изучены многочисленные другие
исследования, и у каждого из них есть свои сторонники. В настоящий момент существует несколько методик, при
знанных приемлемыми в нормативных целях, при условии, что методика отражена документально надлежащим
образом и обоснована исследователем. Во всех случаях процедуры следует проводить в соответствии с первоис
точником. Список других исследований приведен в таблице С.1.
Недавняя монография ЕСЕТОС приводит новейшую информацию по исследованию накожной сенсибилиза
ции [44].
Т а б л и ц а С. 1— Альтернативные методы исследования сенсибилизации замедленного типа
1 Метод с использованием полного адьюванта Фрейнда
2 Метод с использованием разделенного адъюванта
3 Метод открытых эпикутанных аппликаций
4 Оптимальный метод Мауера
5 Тест на подушечках стопы морских свинок
6 Кумулятивный метод с увеличением степени контакта
7 Скарификационный метод (с адъювантом и аппликациями)
8 Метод исследования на ушах мыши
9 Местная проба на лимфоузле мыши
Последняя проба в таблице С.1. местная проба на лимфоузле мыши (LLNA). заслуживает особого внимания.
Местная проба на лимфоузле мыши (LLNA) была принята Организацией Экономического Сотрудничества и Раз
вития (OECD) как самостоятельная альтернатива проводящимся исследованиям на морских свинках и как метод
улучшения обращения с животными [83].
33