ГОСТР ИСО 7218—2008
12.3.2 Растворы
12.3.2.1 Общие положения
Допускается использоватьимеющиеся в продаже готовые растворы.
В таком случав следуют рекомендациям изготовителя.
12.3.2.2 Раствор кристаллического фиолетового
12.3.2.2.1 Состав:
кристаллический фиолетовый — 2,0 г;
этиловый спирт (95 %) — 20 см3;
оксалатаммония (C2HeN2OJ — 0.8 г;
вода — 80 см3.
12.3.2.2.2 Приготовление
Растворяют кристаллический фиолетовый в этиловом спирте, а оксалат аммония в дистиллиро
ванной воде. Смешиваютэтидва раствора иоставляютсмесь на 24 ч до использования.
12.3.2.3 Раствор йода
12.3.2.3.1 Состав:
йод—1.0 г;
йодистый калий (KI) — 2.0 г;
вода — 100 см3.
12.3.2.3.2 Приготовление
Йодистыйкалий растворяютв 10см3воды идобавляюткрапинкийода. Послерастворениядоводят
до 100 см3 в мерной колбе.
12.3.2.4 Раствор сафранина
12.3.2.4.1 Состав,
сафранин — 0,25 г,
этиловый спирт (95 %) — 10 см3;
вода — 100 см3.
12.3.2.4.2 Приготовление
Растворяют сафранин в этиловом спирте, затем смешивают сдистиллированной водой.
12.3.3 Техника окрашивания
После фиксации на предметном стекле бактериального мазка, приготовленного из 18—24 -часо
вой культуры или мутного бульона, заливают мазок раствором кристаллического фиолетового. Остав
ляют на 1мин для осуществления реакции.
Стекло под наклоном осторожно промывают в течение несколькихсекунд водой.
Наносят на стекло растворйода. Оставляют на 1мин для осуществления реакции.
Стекло под наклоном осторожно промывают водой в течение нескольких секунд.
Стекло в наклонном положенииосторожнои непрерывно промываютэтанолом (95 %) в течение не
более30 сдо прекращения вымывания фиолетового красителя.
Стекло в наклонном положении осторожно промывают водой для удаления этилового спирта.
Наносятна стекло растворсафранина иоставляютна 10с. Стекло под наклоном осторожно промывают
водой.
Высушиваютстекло.
12.3.4 Оценка результатов
Окрашенныймазокпросматриваютпод микроскопом, используядля этогосветосильныйобъектив
с масляной иммерсией. Бактериальные клетки, окрашенные в синий или фиолетовый цвет, относят к
грамлоложительным (Грам +):другие, окрашенные вцветаоттемно-розовогодо красного, относяткгра-
мотрицательным (Грам -).
Учистыхкультурнекоторыхтипов бактерий в поле микроскопамогут присутствоватькакграмполо-
жительные. так играмотрицательные клетки.
П р и м е ч а н и е — Плотные скопления клеток могут давать нетипичную картину окрашивания.
12.4 Использование биохимических наборовдля идентификации
Можно использовать имеющиеся биохимические наборы для идентификации изолированных
колоний.
Проверяют пригодность биохимических наборов, как показано в ходе оценочных исследований,
опубликованных в международной научной литературе, касающейся предпочтительно микробиологии
пищевых продуктов1’. Такая проверка особенно важна, если изготовитель не имеетданных об адекват
ности своих наборов.
" Запросы об информации следует направлять в национальные, региональные или международные спра
вочные центры, указанные для каждого микроорганизма.
40