ГОСТРИСО 7218—2008
11 Метод выявления (качественный метод)
11.1 Общие положения
Методвыявления являетсяметодом, который определяетприсутствие или отсутствие конкретных
микроорганизмов в данном количестве продукта.
11.2 Принцип
Если в соответствующем международном стандарте нет особых примечаний, перемешивают
(жидкие продукты) или гомогенизируют (прочие продукты) количество Рпродукта, подлежащего анали
зу. с 9 х Рем3или 9 х Ргэлективного/или селективного питательного бульона.
Чтобы облегчить оживление подвергнувшихся стрессовым воздействиям микроорганизмов в
пищевыхпродуктах, пробыобычнопредварительнообогащаютв неселективном питательномбульонес
последующим элективным обогащением и изолированием на селективмой/дифференциальной агаро
вой среде. Применениедвух различных бульонов для обогащения, а также двух или нескольких селек
тивных агаровыхсред увеличиваетчувствительность метода.
Послеинкубации микроорганизмов втермостатепоповерхностиселективной агаровойсреды бак
териологической петлей распределяют выросшую культуру таким образом, чтобы получить изолиро
ванные колонии. Если нет иных указаний, после термостатирования обогащенные питательные
бульоны можно поместить в холодильник, только при условии выполнения оценки влияния охлаждения
на результаты ичеткогоупоминания об этом в протоколе испытания.
Послетермостатирования несколькоколоний (обычно пятьначашку сагаровой средой) подверга
ютидентификации, используя подходящую методикудля подтверждения.
Выбор колоний для подтверждения должен охватывать репрезентативные типы сомнительных
колоний.
11.3 Измероние неопределенности
Оценка неопределенности измерения качественныханализов разрабатывается ИСО/ТК34/ПК 9.
12 Метод идентификации (подтверждения)
12.1 Общие положения
Для биохимического и серологического подтверждения используюттолько чистые культуры.
Стандартные методы подтверждения описаны в соответствующих нормативных документах. В
качествеальтернативы биохимическим методам, приведенным вэтих стандартах, методы подтвержде
ния. указанныевданном разделе(биохимическиенаборы, нуклеиновыепробы), следуетиспользоватьв
условиях, указанных также в данном разделе, если они особо не оговорены в соответствующих
стандартах.
12.2 Приготовление чистой культуры
Приготовление чистых культур начинают с выделения одной колонии в агаровой среде. Затем
выделенную колонию пересевают на неселективную агаровую среду. После инкубации в термостате
выделяютхорошоизолированную колониюдля последующихподтверждающихиспытаний. При необхо
димости посев колонии повторяют.
Желательно выполнять идентификацию, используя клетки одной колонии. Если в одной колонии
недостаточно количества клеточного материала, материал вначале рекомендуется посеять в жидкую
средуили на косой агар (косяк), послечего можноиспользоватьсубкультурудля выполнения испытаний.
12.3 Окрашивание по Граму (модифицированный методХаккера)
12.3.1 Общие положения
Данный способ окрашивания бактериальных клеток позволяет описать морфологию бактерий и
разделитьихнадве группы потому, способны они или нет сохранятьцвет кристаллического фиолетово го
(грамположительные Грам+) в условиях испытания. Результаты такого деления, главным образом,
вытекают из различий в структуре клеточных стенокдвух групп, что коррелирует сдругими основными
различиями междудвумя группами.
Удовлетворительной альтернативой окрашивания по Граму является использование 3 %-ного
раствора гидроокиси калия (КОН). Полную петлю выросшей культуры бактерий перемешивают в двух
каплях раствора КОН. Грамотрицательные (Грам-) бактерии станут причиной увеличения вязкости и
слизистости раствора в течение 30 с. так чтосмесь тянется за бактериологической петлей при поднятии
петли.
Существует несколько приемов выполнения окрашивания по Граму. но все они соответствуют
последовательности, приведенной в 12.3.2.
39