ГОСТРИСО 7218—2008
загрязненные от окружающей среды пробы, ферментированные продукты ипи продукты, содержащие
пробиотики, очевидно представпяют бопьшие проблемы микробиологу-аналитику, чем пробы, которые
содержат очень незначительное количество микроорганизмов. Для таких проблемных образцов реко
мендуется выполнятьэксперименты, используя контрольные микроорганизмы, чтобы подтвердить, что
методдействительно подходитдля анализа данного образца.
10.5.2.2 Проведениеанализа
Если в соответствующихстандартах нет иныхуказаний, объемы образцовдляанализа, менее или
равные 1 см3,обычнодобавляюткобъемусредобычной концентрации, в5—10 разпревышающемуобъ
ем пробы для анализа. Пробы для анализа объемом 1см3и 100 см3 обычно добавляют к равным объе
мам среддвойной концентрации.
Дляобъемов, превышающих100 см3,допускается использоватьболее концентрированныесреды.
Дляособыхцелейстерильнуюобезвоженнуюсредуможнорастворитьвхолодном (или предварительно
нагретомдо 30 °С)образце, подлежащем анализу.
Если нет иных указаний, время, прошедшеесмоментаприготовленияпервогоразведения пробы и
момента засева последней пробирки, многолуночного планшета или флакона, должно составлять
менее 15 мин.
Новую стерильную пипеткуследует использоватьдля каждого разведения.
10.5.3Выбор способа посева
Сущность метода наиболее вероятного числа (НВЧ) заключается в разбавлении пробы до такой
степени, чтобы посевной материал не всегда содержал живые микроорганизмы. По «выходу», т. е. по
количеству посевного материала, дающему рост в каждом разведении, будет оцениваться начальная
концентрациябактерий впробе. Чтобы получитьоценкувширокомдиапазоневозможныхконцентраций,
микробиологи используют серийные разведения, инкубируя в термостате по несколько пробирок (или
чашек и пр.) каждого разведения. НВЧ (MPN) микроорганизмов, присутствующих на уровне исходной
пробы, и точность оценки можно рассчитать с помощью статистических методов на основе числа
положительных иотрицательных пробирок, полученных после инкубации в термостате.
Осуществляют выбор НВЧ из различных существующих конфигураций в соответствии:
- с ожидаемым числом микроорганизмов в анализируемой пробе,
- требованиями регламентов.
- требуемой точностью и
- другими практическими проблемами.
Неопределенностьизмерениязависитотчисла положительныхобразцовдляанализа, наблюдае
мыхпрактическиодинаковым образом, посколькунеопределенность подсчетаколонийзависитотчисла
колоний в чашке. Неопределенностьизмерения увеличивается какфункция корня квадратного изчисла
использованных пробирок. Число пробирок необходимо увеличить в четыре раза для того, чтобы
неопределенность измерения уменьшилась вдвое. Если используют способы только с небольшим чис
лом дублируемых пробирок, неопределенность измерения низкая.
В зависимостиот размераобразецдляанализа можнозасеватьв пробиркиили флаконы, содержа
щие требуемоеколичествожидкойсреды. Для образцовнебольшогообъема можноиспользоватьтакже
многолуночные планшеты.
10.5.3.1 Способодного разведения
Если ожидаемая концентрация микроорганизмов невелика или ожидается ее умеренное измене
ние. наиболее подходящим способом посева будетодна серия равных пробдля анализа. Там. где ожи
даемое соотношение между максимальным и минимальным количеством микроорганизмов менее 25,
десять параллельных проб для анализа является наименьшим числом для работы; для 50
параллель ныхпробироксоотношение200является предельным. Примеры НВЧ
дляодногоразведенияприведены в таблицах В.1—В.4. приложения В.
10.5.3.2 Способ нескольких разведений
Если концентрация микроорганизмов в пробе неизвестна или предполагается ее значительное
изменение, можетпотребоваться посев насерии пробирок из нескольких разведений. Высеваютдоста
точное число разведений, чтобы обеспечить исследование как с положительными, так и с отрицатель
ными результатами. Числоразведенийтакже зависитот метода вычисления, используемогодля оценки
значения НВЧ. Если требуется применение таблиц, то необходимо получить результаты от трех разве
дений. а способы посеваограничиваютсяспособами, представленнымив соответствующихстандартах.
При использовании компьютерных программ число разведений и параллельных пробирок не ограничи
вается.
35