ГОСТ Р 70152—2022
мещают в соответствующее хранилище, где подвергают немедленной заморозке, а затем оставляют
для хранения при низких температурах до тех пор, пока не потребуется использовать эти культуры.
Максимальное время хранения без пересева микроорганизмов при температуре минус (70 ± 10) °С со
ставляет три года.
Оттаивание криопробирок с бактериальными культурами производят непосредственно перед
проведением исследований, для чего требуемые для исследования образцы вынимают из низкотем
пературного хранилища, размораживают в течение 45 с на прогретой заранее до температуры 37 °С
водяной бане, затем образцы вынимают из водяной бани и оставляют при комнатной температуре до
полного оттаивания. Затем содержимое пробирки высевают на чашки с питательными средами. После
дующая заморозка после оттаивания микроорганизмов нежелательна.
13.5 Консервирование бактериальных культур высушиванием из замороженного
состояния (лиофилизация)
13.5.1 Оборудование
В зависимости от способа размещения биопрепаратов при высушивании различают сублимаци
онные установки коллекторного и камерного типа.
В коллекторных установках ампулу, флакон, колбу с биопрепаратом (каждый элемент в отдель
ности) во время сушки связывают с устройством для улавливания водяных паров (конденсатором) ин
дивидуальным трубопроводом.
В камерных установках сосуды с препаратами помещают в общую сушильную камеру, где и осу
ществляется, как правило, весь цикл высушивания препарата.
По принципу работы сублимационные установки подразделяются на периодические, поточно-ци
клические и установки с непрерывным действием.
13.5.2 Подготовка культур к сушке
Качество лиофилизации зависит от качества используемых микробных клеток, от того, насколько
они жизнеспособны и в каких условиях выросли.
Выращивают достаточно большое количество клеток на поверхности питательного агара в чашке
Петри так, чтобы в суспензии содержалось не менее 108 кл/см3, при этом посев чистых бактериальных
культур осуществляют газоном. Их собирают в период максимальной стабильности и жизнеспособно
сти культуры, т. е. в поздней экспоненциальной или ранней стационарной фазах роста (для большин
ства культур суточные).
13.5.3 Защитные среды
Для подготовки клеток к лиофилизации их суспендируют в среде, содержащей растворы защит
ных сред. В качестве криопротекторов используют:
- декстран (10%);
- инозит (5 %);
- глутамат (5 %);
- раффиноза (5 %);
- пептон (0,1—10 %);
- сахароза (10 %);
- лактоза (10 %);
- трегалоза (10 %);
- обезжиренное молоко (10—20 %);
- натрия глутамат (5 %);
- гидролизат казеина;
- 12 %-ный раствор сахарозы;
- лошадиная сыворотка;
- глюкозо-желатиновая среда;
- сахарозо-желатиновая среда.
13.5.4 Подготовка стабилизатора-носителя, в котором проводят лиофилизацию культур
Готовят 20 %-ное снятое цельное молоко и стерилизуют его порциями по 15—20 см3 при темпе
ратуре 112 °С в течение 15 мин. Следует избегать перегрева, так как при этом может произойти кара-
мелизация молока.
Обезжиренное молоко готовят путем центрифугирования цельного молока (3500 об/мин, 40 мин),
затем образовавшийся плотный слой жира удаляют и обезжиренное молоко (обрат) автоклавируют при
температуре 117 °С в течение 15 мин.
35