ГОСТ Р 70152—2022
12.3 Методика приготовления суспензий с заданной концентрацией клеток тестовых
микроорганизмов
Приготовление суспензий с заданной концентрацией клеток тестовых микроорганизмов осущест
вляют с использованием оптического стандарта мутности, соответствующего 0,9—1 млрд, микробных
кл/см3.
В стерильную стандартную пробирку, прилагаемую к стандарту, вносят 3—4 см3разбавителя. Ага
ровую культуру тестового микроорганизма петлей переносят в пробирку и растирают по внутренней
поверхности пробирки, постепенно смешивая с содержащимся в ней разбавителем.
Возможно приготовление бактериальной взвеси методом смыва выросшей культуры со скошенно
го агара 5 см3разбавителя.
Полученную взвесь микроорганизмов интенсивно перемешивают, добиваясь полного и равно
мерного распределения клеток. Мутность полученной взвеси сравнивают с мутностью оптического
стандарта (возможно применение специальных приборов, предназначеных для измерения мутности
клеточных суспензий в пределах диапазона 0,0—6,0 единиц МакФарланда (McF) (0—0,2><109 кл/см3),
который также предварительно тщательно перемешивают.
При визуальном несоответствии мутности приготовленной суспензии стандарту, ее доводят либо
добавлением агаровой культуры, либо добавлением разбавителя. После каждого вносимого изменения
суспензию тщательно перемешивают.
При совпадении мутности приготовленной суспензии и мутности оптического стандарта считает
ся, что концентрация клеток тестовой культуры в данной суспензии примерно соответствует значению,
указанному для данного стандарта (0,9—1x1
о
9
кл/см3).
Для получения суспензии с нужной концентрацией тестового микроорганизма выполняют серий
ные разведения полученной стандартной суспензии описанным выше способом.
Для контроля правильности приготовления суспензии, правильности выполнения разведений и
расчета заражающей дозы проводят контрольный высев в соответствии с 11.4.2.1.3.
13 Этапы сохранения микробиологических культур
13.1 Контрольные (референтные) штаммы микроорганизмов
В качестве контрольных (эталонных) штаммов используют тест-штаммы из официально признан
ных коллекций микроорганизмов, отличающиеся генетической стабильностью и изученными феноти
пическими характеристиками, в том числе чувствительностью к антибактериальным препаратам. В
условиях лаборатории штаммы должны иметь паспорт и храниться в соответствии с действующими
на территории Российской Федерации санитарными правилами и нормами при работе с микроорганиз
мами III—IV групп патогенности таким образом, чтобы возможность мутаций и контаминации культуры
была минимальной.
Хранение культур осуществляется в соответствии с действующими на территории Российской
Федерации санитарными правилами и нормами. Лаборатория должна иметь разрешение на работу с
микроорганизмами III—IV групп патогенности. С учетом различной технической и материальной обеспе
ченности лабораторий возможны два варианты ведения эталонных бактериальных культур:
- без создания запаса эталонной культуры длительного хранения, не требующий специального
оснащения;
- с созданием запаса эталонной культуры длительного хранения с применением криоконсерва
ции, который следует рассматривать как оптимальный.
13.2 Для непродолжительного хранения «рабочих» штаммов их выращивают в пробирке со ско
шенным агаром и хранят в холодильнике при температуре 2—8 °С, субкультивируют в соответствии с
ГОСТ ISO 11133 или другими утвержденными в установленном порядке методическими документами и
стандартами или используют готовые культуры на петлях или в гранулах.
Рабочую культуру готовят накануне исследования. Для этого ее высевают со среды хранения (на
пример, с полужидкого агара) в пробирки со скошенным питательным агаром, с питательным бульоном
или на специальные питательные или дифференциальные среды (если готовые культуры на петлях
или в гранулах).
Процесс ведения эталонных культур, в данном варианте, состоит из следующих блоков:
- восстановление и контроль лиофилизированной культуры;
- создание запаса рабочей культуры;
30