ГОСТ Р 70152—2022
Контроль выполняют путем посева тестового штамма в жидкие, полужидкие или на плотные пи
тательные среды с помощью общепринятых методик. Для плотных сред метод посева должен обеспе
чивать получение изолированных колоний микроорганизмов (например, метода «штриха»). Пробирки и
чашки с посевами инкубируют в термостате при (36 ± 2) °С в течение 18—24 ч.
11.4.1.2 Оценка результатов качественного контроля
Среду считают пригодной, если по истечении срока инкубации тестовый штамм дает хорошо раз
личаемый рост, со всеми типичными для него отличительными признаками, которые предполагается
выявлять на данной среде.
Этими признаками могут быть: помутнение жидкой или полужидкой среды, изменение цвета, об
разование газа, отличительная форма, структура, окраска колоний, наличие и диаметр зоны изменения
цвета и прозрачности среды вокруг колоний. Результаты качественного контроля заносят в журнал.
11.4.2 Количественный контроль
Выполнение количественного контроля должно осуществляться лабораторией, имеющей лицен
зию на работу с необходимыми патогенными микроорганизмами, аттестованной (аккредитованной) в
этой области и располагающей персоналом соответствующей квалификации.
11.4.2.1 Подготовительный этап
11.4.2.1.1 Питательные среды
Для исследования следует использовать свежеприготовленные среды одной варки. Исследуемые
и контрольные среды готовят согласно инструкции изготовителя.
Среды, предназначенные для прямого поверхностного посева, разливают в чашки Петри слоем не
менее 2 мм и предварительно асептически подсушивают одним из следующих способов.
Перевернутые чашки Петри с открытыми крышками выдерживают в термостате или сушильном
шкафу при температуре 25—50 °С до исчезновения капель влаги с поверхности агара. Не пересуши
вать.
Закрытые неперевернутые чашки Петри выдерживают в ламинарном боксе в течение ночи.
Во избежание загрязнения и когда слои среды высушивают не в ламинарном боксе, среду всегда
высушивают таким образом, чтобы поверхность среды, инокуляция которой будет проводиться, была
перевернута вниз.
В качестве неселективной среды при определении ингибирующих и дифференцирующих свойств
контролируемой среды, используют мясопептонный агар, питательный агар, ГРМ-агар, триптон-соевый
агар или их аналоги.
11.4.2.1.2 Разбавитель
Для исследования необходимо использовать стерильный физиологический раствор, содержащий
0,1 % (по массе) пептона. При невозможности приготовления данного разбавителя допускается исполь
зование стерильного физиологического раствора без пептона.
11.4.2.1.3 Подготовка инокулята
За 2 дня до исследования тестовую культуру микроорганизма пересевают со среды хранения на
скошенный питательный агар согласно 13.3.4. На следующий день из полученной агаровой культуры с
использованием стандарта мутности готовят суспензию тестового штамма в стерильном разбавителе с
концентрацией 109 кл/см3 и десятикратные серийные разведения (по 8-е разведение включительно),
согласно разделу 12.
Для контроля разбавления из 6-го и 7-го разведений высевают по 0,1 см3(100 мкл) суспензии пря
мым поверхностным посевом на чашки с питательным агаром. Из каждого разведения делают по три
таких посева. После высева пробирки с разведениями немедленно переносятся в холодильник.
Чашки с посевами инкубируют в термостате при (36 ± 2) °С в течение 18—24 ч.
В день исследования для каждой серии посевов подсчитывают среднее число колоний, вырос
шее на трех чашках. При правильно выполненном разведении среднее количество колоний, выросших
при посеве 0,1 см3 суспензии тестового микроорганизма из 6-го разведения, должно составлять около
100 КОЕ. Соотношение полученных средних значений при посеве из 6-го и 7-го разведений должно
быть близко к 10:1.
В случае если концентрация микроорганизмов в разведениях значительно отклоняется от рас
четной и/или не соблюдена кратность разведения, данный инокулят тестового штамма непригоден для
дальнейшего использования. Подготовку инокулята необходимо повторить.
Для показателей, требующих определения количества внесенных микроорганизмов, рассчиты
вают посевную дозу. Посевная доза — объем конкретного разведения, содержащий необходимое для
посева количество жизнеспособных клеток тестового микроорганизма. В контрольном посеве должно
25