ГОСТ Р 70152—2022
В случае получения достоверного различия результатов, исследование повторяют, удваивая ко
личество повторов: не менее 10 чашек с общей численностью количества учитываемых колоний на
неселективной среде не менее 400.
11.4.4.6 Оценка показателя ингибиции
Для оценки ингибирующих свойств среды Эндо (и ее аналогов) по отношению к микробамассоци-
антам используют тестовый штамм Staphylococcus aureus.
11.4.4.7 Подготовка инокулята
Разведения тестового штамма готовят и контролируют, как указано в 11.4.2.1.3.
11.4.4.8 Методика контроля
Взвесь штамма-ассоцианта из разведений 10~1(108микробных клеток в см3) по 100 мкл засевают
на 3 чашки Петри с испытуемой и контрольной (неингибиторной) средами. В качестве контрольной сре
ды используется питательный агар. Через 24—48 ч инкубации при температуре (36 ± 2) °С
определяют число колоний, сформировавшихся на испытуемой и контрольной средах.
11.4.4.9 Оценка результатов
Ингибирующие свойства среды являются удовлетворительными, если в разведении 10-1 отсут
ствует рост микроба-ассоцианта при наличии роста в контрольных посевах. Результат заносят в журнал
(формуляр) оценки питательной среды (приложение А).
11.5 Контроль на этапе использования питательных сред
В процедуре анализа возможны нарушения использования питательных сред (перегрев, чрезмер
ная инкубация при высокой температуре и т. д.), приводящие к ухудшению их ростовых свойств. Кроме
того, возможно неверное толкование полученного результата, вследствие слабой выраженности при
знака у исследуемого микроорганизма. Контроль на этом этапе позволяет минимизировать подобные
проблемы.
Контроль сред на этапе использования включает:
- контроль температурного режима водяных бань, предназначенных для поддержания плотных
питательных сред в расплавленном состоянии;
- учет времени нахождения среды в расплавленном состоянии;
- постановку положительного и отрицательного контролей каждой партии приготовленной пита
тельной среды.
Данный вид контроля проводится при каждом использовании питательных сред.
11.5.1 Контроль времени нахождения питательной среды в расплавленном состоянии
Питательная среда не должна находиться в расплавленном состоянии более 8 ч. Повторное плав
ление плотной питательной среды не допускается.
11.5.2 Постановка положительного и отрицательного контролей
Постановку контролей осуществляют в процессе идентификации микроорганизмов при выполне
нии подтверждающих тестов.
11.5.2.1 Тестовые культуры
В качестве тестовых культур используют штаммы:
- Е. соМ (например, шт. М17-02 или шт. 1257, шт. АТСС 10536);
- Salmonella typhimurium (например, шт. 9640 или шт. АТСС 13311);
- Staphylococcus aureus (например, шт. 906 или шт. АТСС 6538);
- Pseudomonas aeruginosa (например, шт. АТСС 27853 или шт. АТСС 10145, шт. АТСС 15442);
- Aspergillus brasiliensis (например, шт. АТСС 16404);
- Candida albicans (например, шт. АТСС 10231 или шт. АТСС 24433);
- Enterococcus faecalis (например, шт. АТСС 29212);
- Pseudomonas fluorescens (например, шт. АТСС 948).
Накануне исследования тестовую культуру готовят, как указано в 13.3.4.
11.5.2.2 Методика контроля
Постановку положительного контроля осуществляют путем внесения одной петли агаровой куль
туры тестового штамма в пробирку с используемой средой (средами) для идентификации. Отрицатель
ным контролем служит пробирка с аналогичной средой без посева. Обе пробирки маркируют и помеща
ют в термостат вместе с посевами. Возможен метод посева по ГОСТ 26670.
11.5.2.3 Учет результатов
По истечении срока инкубации в пробирке с положительным контролем должен наблюдаться хо рошо
различаемый рост, со всеми типичными для него отличительными признаками, которые пред-
28