ГОСТ Р 70152—2022
полагается выявлять на данной среде. Цвет индикатора среды должен изменяться на цвет, опреде
ляемый в паспорте среды как положительный результат утилизации данного углевода. В пробирке с
отрицательным контролем среда должна находиться без изменений. Результаты положительного и от
рицательного контролей заносятся в рабочий журнал основного исследования.
12 Правила приготовления серийных разведений
Разведением для микробиологических исследований служит раствор или суспензия исследуемо
го образца, смешанные с девятикратным количеством жидкости для разведения — разбавителем.
Приготовление разведений необходимо:
- при исследовании загрязненных вод в целях снижения количества микроорганизмов на единицу
объема, для обеспечения возможности наблюдения за их ростом или подсчетом колоний;
- для постановки исследований, требующих количественного учета используемых модельных ми
кроорганизмов, например при количественной оценке качества питательных сред, мембранных филь
тров и т. д.
Приемлемое для учета число микроорганизмов составляет:
- для метода подсчета колоний на чашках Петри (90—100 мм) — от 15 до 300 колоний;
- для учета колоний на фильтре (47—50 мм) — от 15 до 100 колоний;
- для учета колоний на фильтре (35 мм) — от 15 до 60 колоний.
Важным моментом в процедуре приготовления разведений является равномерность распределе
ния внесенных микроорганизмов по объему разбавителя. Равномерность распределения достигается
тщательным перемешиванием полученной смеси встряхиванием или пипетированием. Достичь более
качественных результатов позволяет использование специальных приборов — встряхивателя или во-
ртекса.
В процессе приготовления разведений каждый образец с помощью прибора тщательно переме
шивается в течение 5—10 с. Частоту вращения подбирают так, чтобы жидкость, которая образует во
ронку, не доходила до края пробирки на 2—3 см.
12.1 Разбавители
В качестве разбавителей при приготовлении разведений используют:
- пептонно-солевой: в 1000 см3 дистиллированной воды добавляют 1,0 г пептона и 8,5 г натрия
хлористого;
- физиологический раствор: в 1000 см3 дистиллированной воды добавляют 8,5 г натрия хлори
стого.
Для приготовления разбавителя указанные компоненты растворяют в воде, при необходимости, с
подогреванием. Доводят
pH
так, чтобы после стерилизации он был равен 7,0 ± 0,2 при 25 °С. Разлива ют
разбавитель во флаконы. Стерилизуют при 121 °С в течение 20 мин. Помимо перечисленных выше
разбавителей, для приготовления разведений исследуемой воды допускается применение стерильной
водопроводной воды.
12.2 Методика выполнения разведений исследуемой воды
Разведения исследуемого образца воды следует готовить непосредственно перед анализом и ис
пользовать для инокуляции не позже 30 мин с момента приготовления. В стерильные пробирки, коли
чество которых соответствует выбранной степени разбавления исследуемой воды, асептически вносят
по 9 см3разбавителя. В первую из пробирок, содержащих 9 см3разбавителя, не касаясь стенок пробир ки
и поверхности разбавителя, пипеткой вносят 1 см3 хорошо перемешанной пробы воды, тщательно
перемешивают.
Приготовленное первое разведение (10~1) содержит в 1см3суспензии 0,1 см3исходного образца.
В следующую (вторую) пробирку, также содержащую 9 см3 разбавителя, не касаясь стенок пробирки
и поверхности разбавителя, новой пипеткой вносят 1 см3 хорошо перемешанного первого разведения
исследуемой пробы. Смесь тщательно перемешивают. Второе разведение (10~2) в 1 см3суспензии со
держит 0,01 см3 исходного образца.
Процедуру приготовления разведений продолжают по описанной схеме до получения суспензии с
необходимой концентрацией исходного образца.
29