ГОСТ Р 70152—2022
вырастать не менее 25 колоний. Расчет дозы выполняют основываясь на ранее определенных концен
трациях тестового микроорганизма в 6-м и 7-м разведениях, исходя из требований, что посев на одну
чашку не должен превышать 50—100 микробных клеток. При правильно выполненном разведении по
севная доза составляет 50—100 мкл суспензии из 6-го разведения.
После расчета посевной дозы определяют необходимое количество повторов посевов (не ме
нее 5) исходя из расчета, что суммарное количество колоний на всех чашках на одной среде должно
составлять не менее 200 КОЕ.
Приготовленные суспензии можно использовать, если они были охлаждены сразу же после приго
товления и произведения контрольных высевов, и не хранились более 24 ч. Перед исследованием ино
кулят следует тщательно перемешивать, чтобы добиться однородности суспензии микроорганизмов.
11.4.2.2 Методики посевов
11.4.2.2.1 Посев в жидкую питательную среду
Данный метод посева используется при количественном определении показателей ростовых и
дифференцирующих свойств жидких и полужидких питательных сред. Суспензию нужного разведения
тестовой культуры тщательно перемешивают, чтобы добиться ее однородности. Посевную дозу суспен
зии асептически помещают при помощи пипетки в пробирку с исследуемой питательной средой и пере
мешивают. Инкубируют в термостате при (36 ± 2) °С в течение 18—24 ч.
11.4.2.2.2 Посев прямым поверхностным методом
Суспензию нужного разведения тестовой культуры тщательно перемешивают, чтобы добиться ее
однородности. Посевную дозу суспензии асептически помещают при помощи пипетки, на поверхность
заранее подготовленной питательной среды (11.4.2.1.1). Стерильным шпателем культуру распределя ют
по поверхности питательного агара, чтобы добиться равномерного распределения инокулята. После
впитывания инокулята чашки переворачивают и инкубируют в термостате при (37 ± 1) °С в течение
18—24 ч.
11.4.3 Определение показателей «чувствительности» и «скорости роста»
11.4.3.1 Методика исследования
При определении показателей чувствительности и скорости роста используют по 0,1 см3из 4, 5, 6,
7-го разведений для посева на плотные питательные среды и по 1,0 см3из 5, 6, 7 и 8-го разведений для
посева в жидкие среды. Разведения готовят и контролируют, как указано в 11.4.2.1.3.
Посев каждой дозы инокулята выполняют не менее чем на 3 чашки или пробирки в соответствии с
11.4.2.1.3 Посевы инкубируют при (36 ± 2) °С в течение 24 ч. Визуальный учет скорости роста культуры
в каждом взятом в опыт разведении микробной взвеси производят для плотных сред через 12 и 24,
а для жидких — через 3, 6 и т. д. часов инкубации.
11.4.3.2 Оценка результата
Чувствительностью среды считается наибольшее разведение исходной суспензии тестового
штамма с исходной концентрацией около 109 КОЕ/см3, обеспечивающее формирование колоний на
всех засеянных чашках или визуально видимый рост во всех пробирках с исследуемой средой.
Чувствительность среды должна соответствовать параметру, указанному изготовителем в паспор
те данной среды. Если данный параметр изготовителем не указан, то чувствительность должна состав
лять не менее чем 0,1 см3 суспензии из 6-го разведения для плотных и 1 см3 суспензии из 7-го разве
дения для жидких питательных сред.
При отсутствии роста в одной пробирке или на одной чашке с посевом разведения, указанного в
паспорте как чувствительность, опыт повторяется на удвоенном числе пробирок или чашек. Приемле
мым считается наличие роста в 5-ти посевах оцениваемого разведения из 6-ти. Если при повторном
исследовании чувствительность среды не соответствует паспортному значению, то ее бракуют.
Скорость роста контрольной культуры — минимальное время инкубации посевов, за которое при
соответствующем разведении обеспечен отчетливый видимый невооруженным глазом рост культуры во
всех пробирках с жидкими питательными средами (помутнение, наличие пленки, изменение цвета
среды) или формирование типичных, легко дифференцируемых колоний на чашках с плотной средой.
Скорость роста не должна превышать время инкубации, указанное в нормативных документах
для исследований, в которых эта среда используется.
Результат заносят в протокол оценки питательной среды по биологическим показателям.
11.4.3.3 Оценка дифференцирующих свойств на примере среды Эндо и ее аналогов
Для оценки дифференцирующих свойств сред используют два тестовых штамма, отличающихся
по основному дифференцируемому признаку ферментации лактозы Е. coli (Lac+) и Shigella sonnei или
Salmonella typhimurium (Lac-).
26