ГОСТ Р 70152—2022
11.4.3.4 Подготовка инокулятов
Разведения тестовых штаммов готовят, как указано в 11.4.2.1.3. Посевная доза должна содержать
50—100 микробных клеток на чашку, рассчитанная по контрольному посеву.
11.4.3.5 Методика исследования
Из разведений тестовых штаммов, содержащих исходя из контрольных посевов 500—1000 ми
кробных клеток в 1 см3, готовят 3 смеси:
- по 1 см3 каждого штамма Е. coli (Lac+) и Shigella sonnei или Salmonella typhimurium (Lac-);
- по 1 см3 штамма Е. coli (Lac+) и разбавителя;
- по 1 см3 штамма Shigella sonnei или Salmonella typhimurium (Lac-) и разбавителя.
Приготовленные смеси тщательно перемешивают. Из каждой смеси в соответствии с рассчитан
ной посевной дозой (по 50—100 мкл) засевают поверхностным методом не менее чем на 3 чашки с
исследуемой средой. Посевы инкубируют при (37 ± 1) °С в течение 18—24 ч.
По окончании инкубации учитывают выраженность дифференциальных признаков при росте ко
лоний тестового микроорганизма Е. coli (Lac+), ферментирующего лактозу на исследуемой среде (ха
рактерный цвет колоний, среды) и их отсутствие в посевах тестового штамма Shigella sonnei или штам ма
Salmonella typhimurium (Lac-), не обладающего способностью к ферментации лактозы.
11.4.3.6 Оценка результатов
Дифференцирующие свойства среды считают удовлетворительными, если она обеспечивает
определенный в паспорте перечень признаков и степень их выраженности у тестового штамма, обла
дающего искомыми свойствами. Результат заносится в журнал оценки питательной среды по биологи
ческим показателям.
11.4.4Определение процента извлекаемости (% всхожести)
Этот показатель позволяет выявить и оценить наличие и степень ингибирующего влияния иссле
дуемой среды на Е. coli по сравнению с контрольной средой. В качестве контрольной используют ранее
проведенную неселективную среду.
Определение процента извлекаемости (% всхожести) особенно важно для сред, используемых в
методах прямого количественного подсчета (прямой посев исследуемой воды на чашку или фильтр), где
наличие даже относительного ингибирующего влияния среды на искомые микроорганизмы будет
искажать результат и снижать чувствительность метода.
11.4.4.1 Методика исследования
Готовят инокуляты для посева и осуществляют расчет посевной дозы как указано в 11.4.2.1.3.
11.4.4.2 Посев на контрольную и исследуемую среду выполняют прямым посевом согласно
11.4.2.2.2.
11.4.4.3 Чашки с посевами инкубируют в термостате при (36 ± 2) °С в течение 18—24 ч.
После инкубации подсчитывают количество колоний, выросших на каждой чашке. Общее количе
ство колоний во всех повторах (не менее 5) на контрольной неселективной среде должно быть не менее
200. Вычисляют среднее арифметическое значение количества колоний, выросших на контрольной и
исследуемой средах.
11.4.4.4 Обработка результатов
Процент извлекаемости рассчитывают по формуле:
=7^-100%,(2)
Че
где Всхо/о— процент всхожести на исследуемой среде;
Сис — среднее арифметическое значение количества колоний, выросших на исследуемой среде;
Скс — среднее арифметическое значение количества колоний, выросших на контрольной среде.
11.4.4.5 Оценка результатов
Среда признается приемлемой при условии, что различие между средними значениями количе
ства колоний на контрольной и исследуемой средах не достоверно. При этом, как правило, % извлека
емости (всхожести) составляет не менее 80 %.
Расчет достоверности различий средних значений количества колоний, выросших на контрольной
и исследуемой средах, приведен в приложении В.
Результат заносится в журнал (формуляр) количественной оценки питательной среды по биологи
ческим показателям (приложение А).
27