ГОСТ Р 70152—2022
Один из посевов на скошенном питательном агаре используют для постановки тестов на соответ
ствие полученного штамма паспортным (типовым) свойствам. Второй посев используют для создания
запасов рабочей культуры.
При несоответствии штамма видовым и паспортным свойствам использование культуры не до
пускается. В этом случае необходимо разморозить еще одну емкость с эталонной культурой и подвер
гнуть ее аналогичному исследованию.
Если культура снова не прошла контроль, ее снимают с хранения и в дальнейшем не использу
ют. Необходимо получить новую ампулу с эталонной культурой и начать процедуру ведения тестового
штамма сначала.
При удовлетворительном прохождении тестов культуру из пробирки со скошенным питательным
агаром засевают уколом в 3—6 пробирок с полужидким агаром из расчета 1—2 пробирки на месяц в
зависимости от интенсивности работы лаборатории. Посев инкубируют 18—24 ч при 37 °С. Пробирки
закрывают резиновыми или силиконовыми пробками и хранят при 4—8 °С.
Запасы рабочей культуры создают 1 раз в 3 месяца, используя для этой цели новую пробирку из
запаса эталонной культуры. Повторное замораживание размороженной эталонной культуры запреща
ется. Запасы рабочей культуры желательно хранить в отдельном холодильнике.
13.4 Подготовка культур микроорганизмов к процессу длительного хранения при низких
температурах(криоконсервации)
13.4.1 Оборудование, расходные материалы и реактивы
Оборудование:
- автоклав вертикальный;
- термостат;
- микровстряхиватель или вортекс;
- низкотемпературный морозильник на минус 80 °С;
- одноканальный механический дозатор переменного объема (рабочий объем 100—1000 мкл) с
набором наконечников;
- криохранилища или сосуд Дюара, обеспечивающий возможность хранения в жидком азоте;
- водяная баня.
Расходные материалы и реактивы:
- пробирки типа Эппендорф;
- криопробирки с юбками и без, с завинчивающимися крышками со штриховым кодом и без него
с бусами и без бус;
- соломины с хлопковой и гидрофобной пробкой в различных вариантах: 0,3; 0,5 и 1,0 см3 со
штриховым кодом и без него;
- стерильные пластиковые криопробирки с винтовой крышкой объемом 2,0 см3;
- микробиологическая петля;
- спиртовка стеклянная;
- штатив пластиковый для пробирок;
- пластиковые коробки с ячейками;
- чашки Петри;
- этиловый спирт.
13.4.2 Подготовка культур микроорганизмов
Не менее 2-х для каждой коллекционной культуры стерильные пластиковые криопробирки с вин
товой крышкой объемом 2,0 см3 или пробирки типа Эппендорф, устойчивые к низким температурам,
маркируют с указанием номера штамма и даты (месяц, год) криоконсервации. Разливают в подготов
ленные криопробирки по 900 мкл бактериальной бульонной суспензии, добавляют по 900 мкл стериль
ного 20 %-ного раствора глицерина и закрывают крышками. Вместо глицерина можно добавить по 0,1 мг
сахарозы или лактозы, глюкозы, маннита, сорбита, декстрана, поливинилпирролидона, полигликоли,
обеспечивающих защитное действие на наружной поверхности клеточной мембраны, тщательно пере
мешивают на микровстряхивателе или на вортексе.
Перед криоконсервацией из полученной бактериальной суспензии 100 мкл используют для опре
деления жизнеспособности культуры. При этом бактериальную взвесь помещают на поверхность ага-
ризованной среды, обеспечивающей оптимальный рост культуры, растирают шпателем с дальнейшим
термостатированием при температуре инкубации, используемой для культивирования микроорганизма,
который планируется сохранять.
33