ГОСТ Р 70152—2022
- хранение в полужидком агаре при температуре 4—8 °С;
- восполнение запаса рабочей культуры;
- подготовка культуры для целевого использования;
- контроль видовых и паспортных свойств.
Хранение запаса рабочей культуры в полужидком агаре при (4—8) °С не требует специального
оснащения, но порождает необходимость восполнения запасов рабочей культуры путем получения ее
субкультур на среде хранения каждые 3 месяца. Дополнительные пассажи через питательные среды
могут привести к диссоциации штамма и потере тестовых свойств. Восполнять запас рабочей культуры
разрешается только 3 раза (конец 3, 6 и 9-го месяцев) с момента его создания. Это ограничивает срок
использования эталонной культуры, полученной из 1ампулы, 1 годом, по истечении которого необходи мо
вскрыть новую ампулу с тестовой культурой.
Для длительного хранения штаммы находятся в лиофилизированном виде при температуре
4—6 °С или в виде суспензии микроорганизмов в стабилизирующем растворе в замороженном состоя
нии при температуре минус 70 °С и ниже в морозильной камере или в жидком азоте.
В случае необходимости (при длительном хранении) для повышения активности культуры ее не
обходимо предварительно провести через питательные бульоны.
Если «рабочие» культуры были контаминированы или имеет место снижение чувствительности,
необходимо вернуться к исходным культурам.
13.3 Подготовка тестовой культуры для целевого использования
13.3.1 Восстановление лиофилизированной эталонной культуры
Оттянутый конец ампулы с лиофилизированной культурой нагревают над пламенем горелки.
Влажным концом стерильного ватного тампона прикасаются к нагретой части, в результате чего по
являются трещины. Конец ампулы накрывают трехслойной марлевой салфеткой, смоченной 70 %-ным
этиловым спиртом и хорошо отжатой и обламывают пинцетом.
После вскрытия ампула остается накрытой той же салфеткой в течение 1—2 мин. Затем салфет
ку осторожно снимают и вместе с остатками стекла погружают в дезраствор. В ампулу вносят 0,3 см3
питательного бульона для регидратации. В качестве питательного бульона можно использовать мясо-
пептонный бульон, сердечно-мозговой, триптон-соевый, тиогликолевый. Содержимое ампулы переме
шивают, переносят стерильной пастеровской пипеткой или шприцем в пробирку с питательным бульо
ном и инкубируют при (37 ± 1) °С в течение 18—24 ч. Оставшуюся бульонную культуру используют для
оценки степени диссоциации эталонного штамма.
После инкубации из питательного бульона делают высев петлей на скошенный питательный агар
в две пробирки (при восстановлении штамма Е. coli K12F+Strr посев осуществляется на скошенный пи
тательный агар, содержащий стрептомицин). Посевы инкубируют при (37 ± 1) °С 18—24 ч.
Одну пробирку с посевом используют для постановки тестов на соответствие полученного штам
ма видовым, паспортным свойствам. Второй посев на скошенном питательном агаре используют для
создания запасов рабочей культуры.
Культура с измененными свойствами в работу не допускается.
13.3.2 Создание запасов рабочей культуры
При удовлетворительном прохождении контрольных тестов культуру со скошенного питательного
агара (например, для Е. coli K12F+Strr — с питательного агара со стрептомицином) засевают уколом в
столбик с полужидким агаром. В зависимости от интенсивности работы лаборатории посев проводят в
4—7 пробирок, из расчета по 1—2 пробирки на 1 месяц работы и в 1 пробирку для восполнения за пасов
рабочей культуры через три месяца на следующий квартал. Посевы инкубируют 18—24 ч при (37 ± 1) °С.
При наличии роста пробирки закрывают резиновыми пробками и закладывают на хранение при
температуре 4—8 °С.
Одну из пробирок с культурой, предназначенной для восполнения рабочих запасов, маркируют и
хранят отдельно. Запасы рабочей культуры желательно хранить в отдельном холодильнике.
13.3.3 Восполнение запасов рабочей культуры
Восполнение запасов рабочей культуры производится в конце 3, 6 и 9-го месяца с момента вскры
тия ампулы (каждые 3 месяца).
Для восполнения запасов рабочей культуры используется субкультура на среде хранения, полу
ченная ранее при создании запасов или при очередном их восполнении. Из пробирки с культурой, пред
назначенной для восполнения запасов, производят посев в питательный бульон. Посевы инкубируют
31