ГОСТ Р 70152—2022
при (37 ± 1) °С в течение 18—24 ч. Оставшуюся бульонную культуру (например, Е. coli М17-02) исполь
зуют для оценки степени диссоциации.
При наличии диссоциации (по размеру, S-R-диссоциация, др.) подсчитывают количество изменен
ных колоний и общее количество просмотренных колоний. Общее количество просмотренных бактерий
не должно быть менее 30. Затем рассчитывают процент диссоциации по формуле:
количествоизмененныхколоний
Алп
0/
%—
(3)
0/
диссоциации=
о
------------------------------------------------------- 100 %*
/оч
бщее количество просмотренных колоний
Если процент диссоциированных колоний превышает 25 %, то данная культура не пригодна для
дальнейшего использования.
После инкубации из питательного бульона делают высев петлей в две пробирки со скошенным
питательным агаром. При ведении штамма Е. coli K12F+Strr посев осуществляется на скошенный пита
тельный агар, содержащий стрептомицин. Посевы инкубируют при (37 ± 1) °С 18—24 ч.
Один из посевов используют для постановки тестов на соответствие полученного штамма видо
вым, паспортным свойствам. Второй посев на скошенном питательном агаре используют для восполне
ния запасов рабочей культуры.
При удовлетворительном прохождении контрольных тестов процедура закладки культуры на хра
нение осуществляется согласно 13.2, 13.3.5. Восполнение запасов рабочей культуры проводят только 3
раза. По истечении года использования необходимо получить новую эталонную культуру из коллекции
микроорганизмов.
Контрольными тестами являются тесты на проверку жизнеспособности, оценку морфологических
и биохимических свойств с применением селективных сред, возможно использование автоматических
биохимических анализаторов или тест-систем для определения биохимических свойств.
13.3.4 Подготовка культуры для целевого использования в анализе
Накануне использования культуру с полужидкого агара высевают на 2 пробирки со скошенным
питательным агаром (например, Е. coli K12F+Strr пересевают на скошенный питательный агар, содер
жащий стрептомицин). Посевы инкубируют 18—24 ч при (37 ± 1) °С.
Культуру из одной пробирки используют по назначению с предварительной подготовкой соглас
но методическим документам. Вторая пробирка используется для получения культуры для работы на
следующий (второй) день. При необходимости получения культуры тест-штамма на третий день высев
снова производят с полужидкого агара.
13.3.5 Создание запасов эталонных штаммов
Параллельно с постановкой контрольных тестов из пробирки со скошенным питательным агаром
культуру засевают в 2 пробирки с питательным бульоном или на две чашки Петри с агаром и инкубиру ют
18—24 ч при (37 ± 1) °С.
При удовлетворительном прохождении контрольных тестов в пробирке с суточной культурой про
водят подготовку для сохранения культур в условиях низких температур (криоконсервации) в соответ
ствии с 13.4.2. Криопробирки с запасом эталонной культуры устанавливают в криобокс (штатив для
криопробирок) и закладывают на хранение при температуре минус (70 ± 10) °С. Альтернативным вари
антом является хранение в жидком азоте при наличии соответствующего оборудования.
При инкубировании культур на чашках Петри с агаром процедуру подготовки и закладки для дли
тельного хранения при температуре минус (70 ± 10) °С или для хранения в жидком азоте проводят в
соответствии с 13.4.3.
Закладку запасов эталонной культуры на длительное хранение осуществляют единожды на весь
период ее использования и запасы эталонной культуры при хранении в условиях низких температур
восполнению не подлежат.
Данный блок выполняет задачу накопителя биомассы эталонного штамма, что позволяет избе
жать необходимости восполнять запасы рабочей культуры за счет повторных пассажей эталонного
штамма через питательные среды и удлиняет «срок службы» культуры, полученной из одной ампулы.
13.3.6 Создание запасов рабочей культуры
Температуру криопробирки из запасов эталонной культуры доводят до комнатной температуры.
Содержимое аккуратно перемешивают, вносят в пробирку с 8—10 см3 питательного бульона и инкуби
руют при 37 °С 18—20 ч. После инкубации из питательного бульона выполняют высев в две пробирки со
скошенным питательным агаром (для Е. coli K12F+Strr — на питательный агар, содержащий стреп
томицин). Посевы инкубируют в термостате 18—24 ч при 37 °С. Оставшуюся бульонную культуру ис
пользуют для оценки степени диссоциации, как указано в 13.3.1.
32