21
Полное описание процедуры проведения и учета результатов анализа — по [3], [4] с учетом раз-
дела 7, 8.1.
б) МетодПЦРдляидентификации E. coli O157:Н7
Сущностьметода — по 8.3.2.3.
Порядок анализа: подготовкакпроведениюанализа, втомчислеприготовлениерастворовиреакти-
вов, питательныхсред — по 5.1, 5.2, [8]; выделениеинакоплениебиомассыбактериальнойкультурыпутем
отбораотдельныхколоний (неменеетрехсорбитолотрицательныхилилактозоположительных), характер-
ных для E. coli O157:H7 c агаризированных селективно-диагностических сред (сорбитол-агар E. coli
O157:H7- агар и др.) и пересева на поверхность агара Клиглера или Олькеницкого, или Ресселя, или в
триптон-соевыйбульонсдрожжевымэкстрактом; инкубированиепосевовпритемпературе 37 °С 18 — 24 ч;
подготовкаобразцовчистыхкультурканализу; проведениелизисаивыделенияДНК; подготовкакпрове-
дениюПЦР, амплификацияидетекция; оценкарезультатовидентификациинаосновепротокола (файлов)
анализа.
Полноеописаниепроцедурыпроведенияиучетарезультатованализа — по [9].
в) Иммунохроматографическийэкспресс–тестдлявыявленияЕ. coli O157:Н7 [11]
Сущностьметода — этодиагностическаятест-панель, содержащаяиммобилизованныенаподложке
меченныезолотомантитела, обладающиевысокой специфичностьюк Е. coli O157:Н7 иливеротоксинам.
Принципдействияэкспресс-тестаоснованнаметодевизуальнойхроматографии — разновидности
иммуноферментногоанализа.
Антигены Е. coli O157:Н7 или веротоксинов, присутствующих в исследуемом образце, взаимодей-
ствуютсмеченнымизолотомантителамисобразованиемкрасныхлинийвтестовойиконтрольнойзонах.
Исследуютпредварительнообогащенныеобразцы.
Процедурапроведенияанализа.
Селективное обогащение. Навеску анализируемого образца массой (25 ± 0,1) г или объемом
(25 ± 0,1) см
3
вносятв 225 см
3
модифицированногобульонасновобиоцином (мEC-бульон). Принеобходи-
мости анализа других масс (объемов) образцовихпосевпроводятвселективныйбульонвсоотношении
1 : 9 по объему. Твердые образцы измельчают в гомогенизаторе. Посевыинкубируютпритемпературе
(37 ± 1) °С в течение (21 ± 3) ч.
Инактивацияисследуемойкультурымикроорганизма.
1 — 2 см
3
культуры, полученнойпослеселективногообогащения, переносятвпробирку. Инактивиру-
ютобогащеннуюкультурунаводянойбанепритемпературе 100 °С 15 мин.
Тестированиеинактивированнойкультуры.
Инактивированнуюкультуруохлаждаютдокомнатнойтемпературы. Переносят 0,16 см
3
инактивиро-
ваннойкультурывлункудлявнесенияобразцатестовогоустройства.
Учет результатов. Учитывают результаты через 20 мин. Проверяют наличие линий в тестовой (Т) и
контрольной (С) зонах. Результаттестасчитаетсяположительным, есликраснаялинияприсутствуеткакв
тестовой (Т), такивконтрольной (С) зоне. Результаттестасчитаетсяотрицательным, есликраснаялиния
присутствуеттольковконтрольной (С) зоне. Результаттестасчитаетсянедействительным, есликрасная
линияотсутствуеткаквтестовой (Т), такив контрольной (С) зоне.
Положительные результаты необходимо подтвердить, используя агар Мак-Конки с сорбитолом
(СМАК-агар) илиагарМак-Конкиссорбитоломусиленнойселективности (ЦТ-СМАК-агар) споследующей
идентификациейпо 8.7.1 сиспользованиемосновногометодаанализа, предназначенного длявыявления
E. coli O157:H7.
г) Методиммуноферментногоанализадлявыявления E. coli O157:H7 сиспользованиеманализатора
Сущностьметодаипорядокпроведенияанализа — по 8.3.2.4.
Описаниепроведенияиучетарезультатованализа – по 8.4.2.4.
8.8 Выявление и определение количества коагулазоположительных стафилококков и
Staphylococcus aureus
8.8.1 Основные методы анализа
8.8.1.1 Подготовкакпроведению, проведение, обработкаиоформлениерезультатованализа — по
ГОСТ Р 52815 с учетом разделов 4 – 7, 8.1 и ниже приведенного.
ГОСТР 54354—2011