20
ДействиехромогенныхпитательныхсреддлявыявленияЕ. coli основанонаобнаруженииспецифи-
ческогофермента
b
-глюкуронидазыуэтихмикроорганизмовсобразованиемпродуктов, окрашивающихих
колонии в специфическийцвет, а флюорогенных — врасщеплениифлюорогенногосубстратаферментом
b
-глюкуронидаза, содержащимся в клетках Е. coli, с образованием флюоресцирующего (под воздей-
ствиемУФ-света) продуктавпитательнойсреде.
Порядокпроведенияанализасиспользованиемхромогенныхифлюорогенныхпитательныхсред:
подготовка к анализу — по разделу 7, 8.1; посев суспензии (твердых образцов) или жидких образцов на
поверхность плотной хромогенной или в жидкую питательную среду — по [16]; термостатирование при
температуре 37 °С в течение (21 ± 3) ч; учет и оценка результатов анализа; после термостатирования на
хромогеннойплотнойпитательнойсредеколонии E. coli приобретаюттемно-синийилифиолетовыйцвет,
колиформныебактерии — розовый, красный; прииспользованиифлюорогеннойсредыу E. coli отмечается
наличиефлюоресценцииприоблученииультрафиолетовойлампой.
Полноеописаниепроцедурыпроведенияиучетарезультатованализасиспользованиемхромоген-
ныхифлюорогенныхпитательныхсред — по [16].
8.7.2 ВыявлениеиидентификацияэнтерогемморагическойкишечнойпалочкиЕ. coli О157:Н7
ВыявлениеЕ. coli O157:Н7 сприменениемдифференциально-диагностическогометодаоснованона
использованиибиохимическихособенностейданногомикроорганизма — отсутствииспособностифермен-
тироватьсорбитоли наличиипродукцииверотоксинов VT1, VT2.
Порядок анализа при выявлении Е. coli О157:Н7: подготовкаканализу — поразделу 7, 8.1; отбор
25 гизнавескипробыивнесениевселективнуюпитательнуюсреду; инкубированиепосевавселективной
питательной среде при температуре 37 °С в течение 18 — 24 ч; посев из селективной среды на плотную
питательнуюсреду, обладающуюселективнымисвойствамидляЕ. coli О157:Н7; термостатированиепосе-
ва 24 ч при температуре 37 °С; просмотр посевного материала и выявление [10] на питательной среде
колоний, характерныхдляЕ. coli О157:Н7; биохимическаяисерологическаяидентификациявыявленных
микроорганизмов; изучение токсигенных свойств (при положительном результате исследований); учет и
оценкарезультатованализа.
Полноеописаниепроцедуры проведения идентификацииЕ. coli О157:Н7 иучетарезультатованали-
за — по [10].
8.7.3 Выявление Е. coli с использованием пластин (подложек) [12], [13] или их аналогов
Подготовкаобразцов, внесениеисследуемойвзвесинаповерхность этихпластин (подложек) — по
8.1, 8.2.
Пластины (подложки) длявыявленияЕ. coli — готовыестерильныесистемыспластифицированной
средой, содержащеймодифицированныйпитательныйсоставсжелчьюидругимиселективнымикомпо-
нентами, ингибирующимиростграмположительных микроорганизмов.
Принципдействияоснованнавыявленииу E. coli специфическогофермента
b
-глюкуронидазы. Хро-
могенныйсубстратХ-глюкуронид, используемыйвпитательнойсреде, позволяетвыявитьглюкуронидаз-
нуюактивность. Клетки E. coli сорбируютХ-глюкуронид, внутриклеточнаяглюкуронидазарасщепляетсвязь
междуглюкуронидомихромофором, который, высвобождаясьвприсутствиихромогенногосубстрата, ок-
рашивает колонии E. coli впурпурныйцвет. Прииспользованиидругогохромогенногосубстратаколонии
E. coli могутприобретатьинойцвет, например, синий.
Проведениеанализа — по 8.1, 8.2.
Инкубируютпосевы 24 чпритемпературе 35 °С — 37 °С.
Ростмикроорганизмовпроявляетсяввидеколонийпурпурного (синего) цвета.
Учетрезультатованализа — поГОСТР 50454.
Для автоматического учета и регистрации результатов анализа на наличие E. coli разрешается ис-
пользоватьустройства, допущенные дляприменениявэтихцелях.
8.7.4 Ускоренные методы анализа
8.7.4.1 Организация проведения анализа — по разделу 6, подготовка к проведению анализа — по
разделу 7, подготовкапробиотборихнавесокприпроведениианализа — по 8.1.
а) МетодвыявленияЕ. coli, основанныйнапринципеимпеданса
Сущностьиэтапывыполненияметода — по 8.3.2.2.
ГОСТР 54354—2011