15
ПриположительномрезультатеанализаегоподтверждаютпоГОСТР 52814.
д) Твердофазныйиммуноферментныйанализсиспользованиемполистирольныхпланшет
Сущностьметодаосновананавыявлениисальмонеллпутемпостановкииммуноферментнойреакции
[20].
Анализвыполняютсиспользованиемполистирольныхпланшетов, покрытыхмоноклональнымианти-
телами к термостабильномуантигенусальмонелл. Использованиетвердойфазыпозволяетнадежнораз-
делятькомпонентыреакциизасчетспецифичнойиммуннойсорбциисальмонелликоньюгатовнаповерх-
ностипланшета.
Результатом проведения ИФА является образование легко детектируемого комплекса антиген-
антитело (сэндвича) влункахсположительнымиисследуемымипробамииположительнымконтролем. При
наличии сальмонелл раствор в лунках окрашивается в синий цвет. Для фиксации результатов реакции в
лункидобавляютостанавливающийреагент, чтосопровождаетсяизменениемсинегоцветанажелтый.
Процедура проведения анализа: предобогащение 25 г пробы в 225 см
3
забуференной пептонной
воды в течение 18 — 24 ч при температуре 37 °С; обогащение в течение 18 — 24 ч при температуре
(45,0 ± 0,5) °С 1 см
3
жидкойфазыизсредыпредобогащенияв 10 см
3
бульонаРаппопорта-Вассилиадиса;
переноспо 1 см
3
культуральнойжидкостипослеселективногообогащениявотдельнуюпробирку, каждая
изкоторыхсодержит 10 см
3
модифицированного GN-бульона (сдобавкой 10 мкг/см
3
новобиоцина); инкуби-
рование 4 — 6 чпритемпературе (45,0 ± 0,5) °С; автоклавированиесмесибульонов (по 1 см
3
) притемпера-
туре 120 °Силинакипящейводянойбане 20 мин; охлаждениебульонадляпоследующегоисследования
методомИФА; подготовкарабочихразведенийрастворов, входящихвкомплекттест-системы; извлечение
изпакетовнеобходимогоколичествастрипов; внесениепо 0,1 см
3
исследуемыхбульоновположительного
иотрицательногоконтролейвсоответствующиелунки; инкубированиепланшетаприкомнатнойтемперату-
ре в течение 30 мин; промывание лунок; добавление по 0,1 см
3
конъюгата моноклональных антител с
пероксидазой; инкубацияпланшетаприкомнатнойтемпературевтечение 30 мин; промываниелунок; до-
бавлениесубстратаивыдержкапланшетаприкомнатнойтемпературевтемноте 30 мин; визуальныйучет,
остановкареакциииинтерпретациярезультатов.
Подтверждениеположительныхрезультатов — поГОСТР 50455, ГОСТР 52814.
Прииспользованиитестовойсистемыдлявыявлениясальмонеллпроцедурапроведенияанализа
состоит из следующих этапов: предобогащение 25 г пробы в 225 см
3
забуференнойпептоннойводы 16
— 20 чпритемпературе (35 ± 1) °С — (37 ± 1) °С; иммунохимическоесвязываниенапланшетевтечение 30
мин при температуре (35 ± 1) °С — (37 ± 1) °С; отмывка планшета, реактивация поврежденных клеток
сальмонеллвлункахпланшетавтечение 4 чпритемпературе (35 ± 1) °С — (37 ± 1) °С; добавлениевлунки
по 0,1 см
3
коньюгата; инкубациявтечение 30 минпритемпературе (35 ± 1) °С — (37 ± 1) °С; втораяотмывка
планшета; добавление в лунки 0,1 см
3
субстрата/хромогена; инкубацияв течение 15 мин при комнатной
температуревтемноте; добавлениестоп-раствора.
Спомощью 96-луночногоИФА-планшетаможновыполнятьанализыотодногодо 94 образцоводно-
временнокакпривизуальной, такиавтоматическойоценкерезультатов.
Приположительныхрезультатаханализананаличиесальмонеллпроводятбиохимическоеисероло-
гическоетестированиеиокончательнооцениваютрезультатыанализапоГОСТР 50455.
е) Биохимическаяидентификациямикроорганизмоврода Salmonella сприменениемтест-систем (стри-
пов) промышленногопроизводства, зарегистрированныхвРоссийскойФедерации
Длябиохимическойидентификациипризнаковбактерийрода Salmonella допускаетсяиспользовать
наборытест-систем, зарегистрированныхвРоссийскойФедерации.
Порядокиспользованиятест-системиучетрезультатованализа — поГОСТР 52814 (пункт 8.5).
ж) Методвыявленияпатогенныхмикроорганизмовсиспользованиемэкспресс-тестов — по [11].
Иммунохроматографическиеэкспресс-тестыпредназначеныдлявыявленияпатогенныхмикроорга-
низмовипредставляютсобойдиагностическуютест-панельслункойдлявнесенияобразца, окномстесто-
войиконтрольнойзонами. Экспресс-тестсодержитиммобилизованныенаподложкемеченныезолотом
антитела, обладающиевысокойспецифичностьюкопределяемыммикроорганизмам.
Сущностьдействияэкспресс-тестовосновананаметодевизуальнойиммунохроматографии — раз-
новидностииммуноферментногоанализа. Антигеныопределяемыхбактерий, присутствующиевисследуе-
мом образце, взаимодействуют с меченными золотом антителами с образованием комплекса антиген-
антитело. Припрохождениипоподложкетестакомплексантиген-антителосвязываетсясиммобилизован-
нымиантителами, образуякрасныелиниивтестовойиконтрольнойзонах, свидетельствующихоналичии
искомогомикроорганизмависследуемомобразце.
Процедурапроведенияанализасостоитизследующихэтапов.
ГОСТР 54354—2011