16
Неселективное обогащение: навеску анализируемого образца массой (25,0 ± 0,1) г или объемом
(25,0 ± 0,1) см
3
вносятв 225 см
3
забуференнойпептоннойводы. Принеобходимостианализадругихмасс
(объемов) образца их посев проводят в забуференную пептонную воду в соотношении 1 : 9 по объему.
Твердыеобразцыизмельчаютвгомогенизаторе. Посевыинкубируютпритемпературе (37 ± 1) °Свтечение
(21 ± 3) ч.
Селективное обогащение: 0,1 см
3
обогащеннойкультурыпосленеселективногообогащенияпере-
носят в 9,9 см
3
средыРаппопорт-Василиадиса. Посевыинкубируютпритемпературе (41 ± 1) °Свтечение
(21 ± 3) ч.
Инактивация сальмонелл: 1 — 2 см
3
культуры, полученной после селективногообогащения, пере-
носят в пробирку. Инактивируютобогащеннуюкультурунаводянойбанепритемпературе 80 °Свтечение
20 мин. Оставшуюся после селективного обогащения культуру используют для подтверждения положи-
тельныхрезультатов.
Тестированиесальмонелл: инактивированнуюкультуруохлаждаютдокомнатнойтемпературы. Пере-
носят 0,16 см
3
инактивированнойкультурывлункудлявнесенияобразцатеста.
Учет результатов анализа: учитывают результаты через 20 мин после внесения инактивированной
исследуемойкультурывтестовуюлунку. Приэтомвыявляютналичиелинийвтестовой (Т) иконтрольной
(С) зонах. Результаттестасчитаетсяположительным, есликраснаялинияприсутствуеткаквтестовой (Т),
так и в контрольной (С) зоне. Результат теста считают отрицательным, если красная линия присутствует
тольковконтрольной (С) зоне. Результаттестасчитаетсянедействительным, есликраснаялинияотсутству-
еткаквтестовой (Т), такив контрольной (С) зоне.
ПоложительныйрезультатподтверждаютпоГОСТР 52814.
8.4 Выявление и определение Listeria monocytogenes
8.4.1 Основные методы анализа
8.4.1.1 Подготовка, проведение и обработкарезультатовисследований — поГОСТР 51921 сосле-
дующимдополнением.
Хромогенныеифлюорогенныепитательныесреды — по 8.3.1.
ВхромогеннойсредеОттавиани-Агости (приложениеА) наличиеингибиторовподавляетростнекото-
рыхвидовлистерий (L. seeligeri, L. grayi, L. welshimeri), грамположительныхиграмотрицательныхбакте-
рий, а также дрожжей и плесневых грибов. Рост L. monocytogenes и L. innocua не подавляется, а рост L.
ivanovii — задерживается. Вселистерииобладаютактивностьюфермента
b
-D-глюкозидазыиобразуют
привзаимодействиисхромогеннымсубстратомсине-зеленыеколонии. L. monocytogenes выявляетсяпо
наличию ферментафосфатидилинозит-фосфолипазыС. Фосфолипазнаяактивностьвыявляетсяпонали-
чиюзоныпросветлениявокругколоний L. monocytogenes. Кроме L. monocytogenes только L. ivanovii прояв-
ляетфосфолипазнуюактивность.
Посевнаповерхностьхромогеннойсредывыполняютмикробиологическойпетлейсосредобогаще-
ния, приведенныхвразделе 5.
Инкубируютпосевы 24 чпритемпературе 37 °С. Приотрицательномрезультатепродлеваютинкуба-
циюещена 24 ч. Всесине-зеленыеколониисзонойпросветлениясредывокругколонийучитываютпред-
положительно как наличие Listeria monocytogenes. Для получения окончательных результатов подозри-
тельныеколонииизучаютпоГОСТР 51921.
Вхромогенной питательной среде «Основадиагностическогоагарадлялистерий» (приложениеА)
дифференциация L. monocytogenes отдругихвидовлистерийосновананавыявленииактивностифосфати-
дилинозит-специфичнойфосфолипазнойСактивностииферментации
a
-метил-D-маннозида. Ферментфос-
фолипаза С является важным специфическимферментом и встречается только у L. monocytogenes и L.
ivanovii. Онгидролизуеточищенныйсубстрат (FD227), добавляемыйвсреду, врезультатечеговокругколо-
нийлистерийформируетсязонапомутнениясреды. Дифференциацияколоний L. monocytogenes и L. ivanovii
приэтомосновананаутилизации
a
-метил-D-маннозида. L. monocytogenes ферментирует этот субстрат,
формируя желтый ореол вокруг колоний, которыйотсутствуетвокругколоний L. ivanovii.
Приполученииположительных результатовнаналичие L. monocytogenes сиспользованиемхромо-
генныхифлюорогенныхпитательныхсредрезультатыподтверждаютанализомколонийэтихмикроорганиз-
мовпоГОСТР 51921, втомчислесистемыбиохимическойидентификации.
ГОСТР 54354—2011