14
Порядоквыполненияметода: източечныхпробмяснойпродукцииотбирают 25 гивносятвобогати-
тельныйбульон (225 см
3
), еслимассапробыиная, чем 25 г, используютнеобходимоеколичествонеселек-
тивной среды, исходя из соотношения 1 : 10; гомогенизируют пробу, выполняют посев и термостатируют
егопритемпературе (37 ± 1) °Свтечение 16 — 18 ч; переносят 1 см
3
изобогатительногобульонав 100 см
3
селективного бульона и инкубируют посев 18 — 24 ч при температуре (41,5 ± 0,5) °С для накопления
сальмонелл; затемпроводятобработкукультуральнойжидкостилизирующимбуферомдляденатурации
бактериальнойоболочкисальмонелливысвобождениярибосомнойРНК; выполняютгибридизациюфраг-
ментоврибосомнойРНКскомплементарныммеченымзондом; осуществляютхемилюменесцентоедетек-
тированиепродуктовреакции.
Порядокускореннойидентификациибактерийрода Salmonella: отбортрех — пятихарактерныхколо-
нийсдифференциально-диагностическихсред; пересевихнапитательныйагариинкубированиепритем-
пературе 37 °Свтечение 24 ч; обработкасуточнойкультурылизирующимбуферомдляденатурациибакте-
риальнойклеткиивысвобождениярибосомальнойРНК; гибридизацияфрагментоврибосомнойРНКском-
плементарныммеченымДНК-зондом; хемилюминесцентноедетектированиепродуктовреакции. Общее
времядетекциибактерийрода Salmonella этимметодомсоставляет 2 ч.
Описаниепроведенияиучетарезультатованализа — по [5].
Привыявлениибактерийрода Salmonella результатыподтверждаютвсоответствиисГОСТР 52814.
б) Метод, основанныйнаиспользованиипринципаимпеданса
Подготовкаивыполнениеэтогометода — поразделам 4, 6, 7, 8.1, [3], [4].
Сущностьметодаосновананапринципеизмерениясопротивления (импеданса) вжидкойпитатель-
нойсреде, специфическойдляисследуемогомикроорганизма, взависимостиотсодержаниявнейконтро-
лируемыхмикробныхклеток.
Проведениеиучетрезультатованализа — по [3], [4].
в) Методполимеразно-цепнойреакции (ПЦР) дляидентификациисальмонелл [9]
Сущностьметодаосновананаобнаруженииспецифическихцелевыхнуклеотидныхпоследователь-
ностейДНК, присутствующихвмикроорганизмах, посредствомполимеразнойцепнойреакциивреальном
времени.
Используютэтотметод, особеннопризатрудненияхвидентификациисальмонеллвзаменрасширен-
ногонаборабиохимическихтестов, вслучаяхотсутствияагглютинациикультурысполивалентной O-сыво-
роткой (А, В, С, D, Е) исосмесьюО-сыворотокредкихгруппприположительномрезультатестандартного
наборабиохимическихтестов; припредположительномрезультатевслучаеналичияагглютинацииссыво-
роткамиредкихгруппсальмонелл; нетипичныхрезультатахбиохимическихтестов (отклоненияподвуми
болеепризнакам).
Порядокпроведенияанализа:
- подготовкааппаратуры, материалов, реактивовипитательныхсредвсоответствиисустановленны-
митребованиями;
- выявлениеинакоплениебиомассыбактериальныхкультурдляидентификации, длячегоотбирают
отдельныеколониисагаризованныхселективно-диагностическихпитательныхсред;
- подготовкаобразцовчистыхкультурканализунаанализаторе (смывысповерхностипитательной
среды с концентрацией клеток в 1 см
3
не менее 5
·
10
6
);
- проведениелизисаивыделениеДНК;
- подготовкакпроведениюПЦР;
- ампфликацияидетекция;
- созданиепротокола (файла) анализа.
Полноеописаниепроведенияиучетарезультатованализа — по [9].
г) Методиммуноферментногоанализа
Сущностьметода: выявлениесальмонеллоснованонаприменениикомплексавысокоспецифичных
антителкантигенамОиН, чтопозволяетопределитькакподвижные, такинеподвижныештаммысальмо-
неллпослепредварительногонеселективногообогащенияпроб.
Порядокпроведенияанализа: подготовкапроб — по 8.1; предварительноенеселективноеобогаще-
ниесальмонелл — по 8.3.1; процедураиммуноконцентрациисиспользованиеманализаторадляавтомати-
зированногоопределениясальмонелл; интерпретациярезультатов; биохимическоеподтверждениепринад-
лежности выделенных характерных микроорганизмов к бактериям рода Salmonella; оценка результатов
анализа.
Проведениеиучетрезультатованализа — по [8].
ГОСТР 54354—2011