18
30 мин; промываниелунок; добавлениевлункипо 0,1 см
3
коньюгатамоноклональныхантителспероксида-
зой; инкубацияпланшетапритемпературе 37 °Свтечение 30 мин; промываниелунок, добавлениесубстра-
таивыдержкапланшетаприкомнатнойтемпературевтемноте 30 мин; визуальныйучет, остановкареак-
ции. Учетрезультатовиподтверждениеположительныхрезультатов — поГОСТР 51921.
е) Иммунохроматографическийэкспресс-тест [11]
Сущностьипринципметодаоснованынавыявлении Listeria monocytogenes сиспользованиемим-
мунохроматографического теста, представляющего собой диагностическую тест-панель с лунками для
внесенияобразцаиокномстестовойиконтрольнойзонами — по 8.3.2.
Процедурапроведенияанализа.
Предварительноеселективноеобогащение: навескуанализируемогообразцамассой (25,0 ± 0,1) г
илиобъемом (25,0 ± 0,1) см
3
вносятв 225 см
3
бульонаФразераполовиннойконцентрациииливселектив-
ный бульон для листерий (ЮВМ). При необходимости анализа других масс (объемов) образца их посев
проводятвселективнуюсредубульонЮВМвсоотношении 1 : 9 пообъему. Твердыеобразцыизмельчают
вгомогенизаторе. Посевыинкубируютпритемпературе (30 ± 1) °Свтечение (21 ± 3) ч.
Селективноеобогащение: 0,1 см
3
культурыпослепредварительногоселективногообогащенияпере-
носятв 9,9 см
3
бульонаФразераилибульонадляобогащениялистерий (ЮВМ). Посевыинкубируютпри
температуре (37 ± 1) °Свтечение (21 ± 3) ч.
Инактивациялистерий: 1 — 2 см
3
культуры, полученнойпослеселективного обогащения, переносят
впробирку. Инактивируютобогащеннуюкультурунаводянойбанепритемпературе 80 °Свтечение 20 мин.
Оставшуюсяпослеселективногообогащениякультуруиспользуютдляподтвержденияположитель-
ныхрезультатов.
Тестирование L. monocytogenes: инактивированнуюкультуруохлаждаютдокомнатнойтемпературы.
Переносят 0,18 см
3
инактивированнойкультурывлункудлявнесенияобразцаэкспресс-теста.
Результатыанализовучитываютчерез 20 минпослевнесенияинактивированнойисследуемойкуль-
турывтестовуюлунку, длячеговыявляют наличиелинийвтестовой (Т) иконтрольной (С) зонахэкспресс-
теста. Результаттестасчитаетсяположительным, есликраснаялинияприсутствуеткаквтестовой (Т), таки
вконтрольной (С) зоне. Результаттестированиясчитаетсяотрицательным, есликраснаялинияприсутству-
еттольковконтрольной (С) зоне. Результаттестированиясчитаютнедействительным, есликраснаялиния
отсутствуеткаквтестовой (Т), такив контрольной (С) зоне.
Положительный результат подтверждают, используя дифференциально-диагностические средыпо
ГОСТР 51921.
8.5 Выявление и определение энтерококков (E.faecalis, E.faecium)
8.5.1 Основные методы анализа
8.5.1.1 Подготовка, проведениеиучетрезультатованализа — поГОСТ 28566 (пункты 4, 5) сучетом
разделов 4 — 7 инижеприведенного.
Ряд десятикратных разведений выполняютвзависимостиотпредполагаемой контаминациипро-
дукта.
Хромогеннаясредатипа «основахромогенногоагара» длявыделенияидифференциации E. faecalis
и E. faecium, кромепитательныхвеществ, содержитарабинозуихромогенныйсубстрат, которыйокраши-
ваетколонииэтихмикроорганизмоввразличныйцвет. E. faecalis неферментируетарабинозуиформирует
колониисинегоцвета. E. faecium ферментируетарабинозуиобразуетколониизеленойокраски.
Нахромогенныхагаровыхсредах, всоставекоторыхимеетсяэскулинипредназначенныхдлявыяв-
ленияэнтерококковиД-стрептококков, этимикроорганизмыгидролизуютэскулинспочернениемсреды.
Селективностьсредыобеспечиваетсяналичиемвнейканамицинаиазиданатрия (ингибированиеграмот-
рицательноймикрофлоры), ижелчныхкислот (ингибированиеграмположительныхмикроорганизмов).
ЭнтерококкиистрептококкигруппыДобразуютхарактерныебесцветныеилисерыеколонии, окружен-
ныечернымореолом. Окончательнаяидентификацияэтихмикроорганизмовсизучениемихбиохимичес-
кихсвойств — поГОСТ 28566.
Для контроля качества среды используют штамм согласно ГОСТ Р ИСО 11133-2. На данной среде
можетнаблюдатьсяростлистерийистафилококков.
8.5.2 Ускоренный метод анализа путем измерения электрического сопротивления (импе-
данса)
8.5.2.1 Подготовка к анализу и сущность метода — по 8.3.2.
ГОСТР 54354—2011