17
8.4.2 Ускоренные методы анализа
8.4.2.1 Приподготовкеканализамиихвыполнениируководствуютсяразделами 4, 6, 7, [4], [5], [9].
а) Методвыявленияиопределения L. monocytogenes наосновегетерогенноготвердофазногогибри-
дизационногоДНК-РНКанализасхемилюминесцентнымдетектированием
Егоприменяютдляускоренноговыявленияи/илиподтвержденияпринадлежностик L. monocytogenes
культурбактерий, выделенныхмикробиологическимиметодами [5].
Процедуравыполненияметода: източечныхпробмяснойпродукцииотбираютнавеску 25 г, вносятв
225 см
3
среды первичного накопления, и инкубируют посевы при температуре 37 °С в течение (24 ± 2) ч;
затем из этого посева отбирают 0,1 см
3
суспензии и вносят в 10 см
3
бульона Фразера для вторичного
обогащения; термостатируютпосевпритемпературе (37 ± 1) °Свтечение 48 ч; обрабатываюткультураль-
нуюжидкостьлизирующимбуферомдляденатурациибактериальнойклеткиивысвобождениярибосомной
РНК; осуществляютгибридизациюфрагментоврибосомнойРНКскомплементарныммеченымДНК-зон-
доми хемилюминесцентноедетектированиепродуктовреакции.
Ускореннаяидентификациякультур, выделенныхизмясныхпродуктов, иопределениеихпринадлеж-
ности к L. monocytogenes предусматривает следующее: получение суточной культуры микроорганизма;
обработкусуспензиисуточнойкультурыклетоклизирующимбуферомдляденатурациибактериальнойклетки
ивысвобождениярибосомнойРНК; гибридизациюфрагментоврибосомнойРНКскомплементарныммече-
нымДНК-зондом; хемилюминисцентноедетектированиепродуктовреакции. Общеевремяидентификации
L. monocytogenes — 2 ч.
Описаниепроведенияиучетарезультатованализа — по [5].
б) Методизмеренияэлектрическогосопротивления (импеданса)
Подготовкакпроведениюанализа — по 4.2, разделам 6, 7.
Сущностьметода — по 8.3.2.
Полноеописаниепроцедурыпроведенияиучетарезультатованализасиспользованиемэкспресс-
анализатора — по [4].
в) МетодПЦРприидентификации Listeria monocytogenes сиспользованиемтест-систем, разрешен-
ныхкприменениювпищевойпромышленности, допускаетсяиспользоватьодновременносопределением
лецитиназнойи
b
-гемолитическойактивности [9].
Сущностьметода — по 8.3.2.
Порядок проведения анализа — по 8.3.2. Первичный посев для выявления Listeria monocytogenes
осуществляютпоГОСТР 51921.
Дляопределенияпринадлежностихарактерныхколонийк Listeria monocytogenes отбираютотдель-
ные (3—4) колониисселективно-диагностическихсредпослеихинкубированияипересеваютштрихамина
поверхностьплотныхпитательныхсредиливпробиркисжидкимисредами (триптонсоевыйбульонсдрож-
жевымэкстрактом) иинкубируют 24 чпритемпературе (37 ± 1) °С.
Полноеописаниепроцедурыпроведенияиучетарезультатованализа — по [9].
г) Методиммуноферментногоанализасиспользованиеманализатора.
Сущностьметода — по 8.3.2.
Проведениеиучетрезультатованализа — поГОСТР 51921 (разделы 7, 8).
д) Методтвердофазногоиммуноферментногоанализа
Сущность метода основана на выявлении бактерий рода Listeria, в том числе L. monocytogenes,
путемпостановкииммуноферментнойреакцииспомощьютест-систем [21]. Анализвыполняютнаполисти-
рольныхпланшетах, покрытыхмоноклональнымиантителамикантигенуэтихбактерий. Результатомпрове-
денияИФАявляетсяобразованиелегкодетектируемогокомплексаантиген-антитело (сэндвича) влункахс
положительнымиисследуемымипробамииположительнымконтролем. Вотсутствиелистерий, атакжев
лункесотрицательнымконтролем, иммунокомплекснеобразуется. Приналичиилистерийрастворвлунках
окрашиваетсявсинийцвет; дляфиксациирезультатовреакциивлункидобавляетсяфиксирующийреагент,
приэтомцветраствораменяетсянажелтый.
Процедура проведенияанализа: предобогащение 25 гпробыв 225 см
3
бульонаФразеравтечение
24 чпритемпературе 30 °С; обогащение 0,1 см
3
предобогащенногобульонаФразерапутемеговнесенияв
10 см
3
бульонаФразераикультивирования 24 чпритемпературе 30 °С; инактивированиежизнеспособных
бактерийпутемтепловойобработкипритемпературе 100 °Свтечение 20 минпослеихинкубациивсреде
обогащения; подготовкарабочихразведенийрастворов, входящихвкомплекттест-системы; извлечение
изпакетовнеобходимогоколичествастрипов; внесениепо 0,1 см
3
исследуемыхрастворов, положительно-
гоиотрицательногоконтролейвсоответствующиелунки; инкубированиепланшетапритемпературе 37 °С
ГОСТР 54354—2011