ГОСТ Р 51331-99
необходимо, то устанавливают pH перед стерилизацией гак. чтобы после автоклавирования pH соста
вил (6,5±0,2) при 25 "С.
Полученную среду разливают по 100 см3 в бутылочки. Стерилизуютпри (121±1) ‘С втечение
15 мин. Мигательнуюсреду хранят втемном месте втечение одного месяца при 0 *С—5 ’С.
Перед использованием среду расплавляют и выдерживают в кипящей водяной бане втечение
20 мин для регенерации среды. Затем средуохлаждают до (48±I) *С и вносят в каждуюбутылочку 1 см‘
раствораселективного агента (7.19.3.2.1.2) и I см* раствора антиоксиданта (7.19.3.2.1.3). Смесь аккурат
но перемешивают, чтобы не было насыщения среды кислородом.
7.19.3.2.2 Питательная среда ГМК-1
Состав:
- кукурузно-молочная смесь
- пептон
- лактоза
- аскорбиновая кислота
- натрий лимоннокислый (трехзамещенный)
- магний сернокислый
- калий фосфорнокислый (однозамещенный)
- натрий фосфорнокислый (двузамешенный) -
агар
- дистиллированная вода
—30 г;
— 30 г;
— 18 г;
— 1г;
— 12 г:
—0.24 г;
—4 г;
— 2 г;
—6 г;
—2000 см3.
Приготовление:
50 г сухой питательной среды вносят в 1000 см1дистиллированной воды, нагреваютдо полного
растворения, при наличии (кадка фильтруют через ватный фильтр, устанавливают pH (7,2±0,2) с
помощью растворааммиака массовой долей 25 % или раствора гидроокиси натрия массовой долей 40 %.
Среду разливают в пробирки высоким столбиком по (10±0,5) или (20±0,5) см’ и стерилизуют при
(121±1) "С в течение (10±2) мин.
Перед использованием пробирки сосредой помещают в кипящую водяную баню и выдерживают
в течение 20 мин для регенерации среды. Затем охлаждают среду до (48±1) *С и в каждую пробирку с
10 см1среды вносят 0,1 см’ селективного агента (7.19.3.2.1.2) и в пробирку с 20 см* среды вносят 02
см* селективногоагента (7.19.3.2.1.2). Содержимое пробирок осторожно перемешивают.
7.19.4 Подготовка образцов и проб
Подготовку образцов и проб проводят в соответствии с 7.18.4.1, 7.18.4.3, 7.18.4.4 настоящего
стандарта. Десятикратные разведения продукта готовят от 1-годо 8-го. При приготовлении проб все
перемешивания проводят максимально осторожно, чтобы исключить насыщение кислородом.
7.19.5 Посев и инкубация
7.19.5.1 Для определения количества бифидобактерий засевают no 1 см’из четырех последних
разведений вдве чашки Петри*.
7.19.5.2 В каждую чашку Петрн заливают по 12—15 см’ регенерированной среды (7.19.3.2.1)
температурой(45±1) "С.
7.19.5.3 Содержимое чашек Петри осторожно перемешивают и остаачяют для застывания.
7.19.5.4 Посте застывания чашки Петри переворачивают донышком вверх и помещают в емкос
ти (7.19.2.1). в которые вкладывают анаэробный агент.
7.19.5.5Термостатирование чашек Петрн осуществляют при (37± 1) ‘С в течение 5 сут в анаэроб
ных условиях.
7.19.5.6 Подсчет колоний
После инкубации подсчитывают количество колоний на чашках Петри. Для подсчета используют
чашки, на которых выросло от 10до 300 колоний. Если колонии имеют гетерогенный вил, необходимо
сделать микроскопические препараты нескольких колоний для подтверждения их принадлежности к
Bifidobacterium.
7.19.5.7 Обработка результатов.
Количество бифидобактерий в пробе Л’, КОЕ/г, определяют по формуле
*Допускается проведение посева разведений продукта в пробирки с высоким столбиком среды (7.19.3.2.2),
с последующей выдержкой в термостате при (37±1) ‘С втечение 5 сут.
18