ГОСТ Р ИСО 10993.4-99
участках обрата. Контролем служит близкий по составу и специфике применения материал с известными
медико-биологическими свойствами.
По аналогии, относительное количество клеток в каждом из классов парциальные значения ОПАТ
вычисляют по формуле
ОПАТ - G . } G.(В.5)
где Gи (?M11IJU — количество клеток г-го класса ( / • I, 2. 3...) на образце и контроле соответственно.
Даже при одинаковом количестве тромбоцитов на образцах парциальные ОПАТ позволяют получать
дополнительную информацию об активации тромбоцитов и тромбогенных свойствах материалов.
Количественной характеристикой «распластывания» клеток является фактор формы F, который вычис
ляют но формуле
F - 4 n S / P \(В.6)
где S — средняя плошадь клеток, см1;
Р — средний периметр клеток, см.
Клетки находятся на 5—7 случайно выбранных микрополях объекта.
Фактор формы должен быть: 0 < F < 1.
Чем ближе значение фактора формы к единице, тем меньше степень морфологических изменений адгс-
зированных клеток.
В.5 Гемолитический метод определения степени активации комплемента поверхностью материала
В.5.1 П р и н и и п м с т о д а
Взаимодействие чужеродной поверхности с кровью приводит к быстрой активации всех систем гемостаза
(свертывающей, фибринолитической, кининовой) и исследование степени активации комплемента, ннлию-
шегося системой гуморального иммунного ответа, представляется важным для прогнозирования гсмосовмс-
стимости материалов и изделий. Предлагаемый метод регистрирует изменение суммарной активности системы
комплемента после контакта сыворотки крови человека с исследуемым образцом.
B.S.2 С р е д с т в ак о н т р о л я
Реактивы:
- эритроциты барана:
- сыворотка крови человека;
- гемолитическая сыворотка кролика:
- гепарин;
- нсронал-мслиналовый буфер. Приготовление маточного раствора буфера: 5.76 г веронала растворяют в
500 мл дистиллированной волы, охлаждают, добавляют S5 г NaC’l, 3.75 г мслинала, 0,22 г СаС1. •2Н,0 и
1.0 г MgCl, • 6Н,0, доводят до 2 л дистиллированной водой. Раствор хранят в холодильнике. Рабочий раствор
готовят непосредственно перед употреблением, доводя 100 мл маточного раствора до 500 мл дистиллирован
ной водой.
Оборудование:
- центрифуга рефрижераторная;
- установка кинетического титрования комплемента;
- специальные кюветы для инкубации.
В.5.3 П р о в е д е н и еа н а л и з а
Первоначально готовят суспензию трижды отмытых эритроцитов барана в всронал -мединаловом буфе
ре (центрифугированием при ускорении 400 g в течение 15 мин) с концентрацией по шкале плотности ФЭК.
равной 0.5 буфера.
Для сенсибилизации эритроцитов в суспензию добавляют гемолитическую сыворотку кролика, раство
ренную в нсронал-мединаловом буфере до титра 1:2400. из расчета 0,3 мл на 55 мл суспензии эритроцитов, и
выдерживают перед началом эксперимента в течение 30 мин при температуре 37 ‘С. периодически перемеши вая.
Затем готовят эталон сравнении но светопропусканию. соответствующий 50 %-ному лизису эритроцитов, путем
смешивания 2,5 мл суспензии сенсибилизированных эритроцитов с 2,5 мл лизата эритроцитов.
Оптическую плотность эталона сравнения измеряют на ФЭК при длине волны 540 нм. и полученное
значение фиксируют на все время эксперимента диафрагмой на левом барабане ФЭК.
Инкубацию предварительно очищенных и отмытых образцов исследуемого материала в виде пленок
(удельной площадью 20 см!) или гранул (массой 5 г) с разбавленной веронал-мединатовым буфером сыво
роткой крови человека проводят в специальных кюветах объемом 1 мл без доступа воздуха.
Активность комплемента определяютдобавлением 100 мкл исследуемой разбавленной сыворотки к 5 мл
суспензии сенсибилизированных эритроцитов. Для обеспечения постоянной температуры <37 ’С’) и кинетичес
кого режима реакции применяют термостатические ячейки с мешалкой.
21