ГОСТ Р ИСО 10993.4—99
ПРИЛОЖЕНИЕ В
(справочное)
Методы in vitro оценки гемолитического действия изделий
В.1 Определение степени гемолиза
B.I.I П ри н ии п м е т о д а
Метод основан на сравнении оптической плотности суспензии вытяжки с кровью с оптической плотно
стью крови при 100 % гемолизе.
Для исследования используют эритроцитарную массу или нитратную кровь человека или кролика. Дтя
обеспечения статистической достоверности отбирают пять (изразцов крови.
В. 1.2 С р е д с т в ак о н т р о л я
Реактивы:
- спиртэтиловый 96 %-ный;
- физиологический раствор (0,85 %-ный водный раствор натрия хлорида);
- натрий лимонно-кислый 5,5-водный дтя ириготоатсния 3,8 %-ного водного раствора натрия нитрата;
- натрии хлорид, ч.дд. или х.ч.;
- вода дисгплированная.
Оборудование:
- центрифуга с частотой вращения 2000 об/мин:
- фотометр:
- пробирки химические обьемом 1—5 мл;
- пипетки обьемом 1—2 мл:
- шприцы объемом 1—5 мл;
- вата медицинская;
- штатив для пробирок;
- ножницы;
- термостат:
- холодильник.
В. 1.3 Г1 р и г о т о в л с н и с в ы т я ж е к
Вытяжки из изделий и материалов готовят в соответствии с ГОСТ Р 5114S и ГОСТ Р ИСО 10993.12.
В. 1.4 П р и г о г о в л е н и с 10 %-н ой в з в е с и э р и т р о ц и т о в
Дчя приготовления взвеси эритроцитов используют эритроцитарную массу или цитратную кровь, приго-
тоатенную на 3,8 %-ноы растворе натрия цитрата в соотношении 1:9.
П р и м е ч а н и е — Срок Хранения нитратной крови (эритроцитарной массы) — 72 ч в холодильнике
при температуре от плюс 4 до плюс 6 “С.
В. 1.4.1 Отмывание эритроцитов
Цитратную кровь (эритроцитарную массу) в количестве 5 мл центрифугируют при частоте вращения
900 об/мин в течение 10 мин. Надосадочную жидкость отделяют. К скалку добаачяюг 8 мл физиологического
раствора. Содержимое осторожно перемешивают и центрифугируют сше 10 мин. Надосадочную жидкость отде
ляют. Она должна быть прозрачной, бесцветной, нс иметь следов гемолиза. Если надосадочная жидкость
не отвечает указанным требованиям, то операцию по отмыванию осадка эритроцитов физиологическим
раство ром повторяют.
В. 1.4.2 Для получения 10 %-ной взвеси эритроцитов 1 мл осадка клеток смешивают с 9
xlt
физиологичес
кого раствора.
П р и м е ч а н и е — Полученную взвесь эритроцитов хранит нс более 24 ч в холодильнике при темпера
туре от плюс 4 до плюс 6 ‘С.
B.I.5 П р и г о т о в л е н и е о п ы т н о йп р о б ы
К вытяжке из изделия, приготовленной на дистиллированной воде, добавляют натрия хлорид из расчета
9 мл на I мл вьпижки. Если вытяжку готовити на физиологическом растворе, то хлорид натрия нс добавляют.
В пробирки с 0,5 мл 10 %-ной взвеси эритроцитов всех образцов крови вносят по 5 мл вытяжки из
изделия.
В. 1.6 П р и г о т о в л е н и ек о н т р о л ь н о йп р о б ы
0.5 мл 10 %-ной взвеси эритроцитов разводят в 5 мл физиологического раствора.
В.1.7 П р и г о т о в л е н и е п р о б ы с о 100 %-н ы м г е м о л и з о м
0.5 мл 10 %-ной взвеси эритроцитов разводят в 5 мл дистиллированной волы. При этом происходит пол
ное разрушение эритроцитов, что соответствует 100 %-ному гемолизу.
П р и м е ч а н и е — Контрольную и со 100 %-ным гемолизом пробы готовят для каждого образца
эритроцитарной взвеси.
17