ГОСТ Р ИСО 10993.4-99
ряет активацию, вызванную исследуемым материалом, а не является артефактом, присушим тест-
системе.
При исследовании взаимодействия изделия с кровью может возникнуть разброс в полученных
результатах из-за неправильною обращения с кровыо либо неадекватно прогнозируемого воздействия
материала до начала исследования. Например, когда исследование ограничивают лишь одним типом
тестов или допускают попадание постороннего материала, не относящегося к испытуемому материалу
или изделию. Материалы, которые предполагают применять в условиях медленного (венозною) пото ка
крови, могут взаимодействовать с потоком совсем иначе, когда их используют с потоком с высо кой
скоростью (артериальная кровь). Изменение конструкции и (или) условий потока могут изменять
гемосовместимость материала in vivo.
6.3 Типы тестов
6.3.1 Т е с т ыi nv i t r o
При рассмотрении результатов, полученных в тестах in vitro, учитывают следующие показатели:
гематокрит, антикоагулянты, условия хранения пробы, срок хранения пробы, наличие контакта с
воздухом и pH. температуру, последовательность проведения исследований изучаемого материала и
контроля, соотношение площади поверхности и обьема, условия динамики жидкости (особенно ско
рость кровотока либо скорость вымывания стенки). Исследования следует проводить, по возможности, в
пределах не более 4 ч. так как многие свойства крови изменяются сразу же после отбора образца.
6.3.1.1 Исследования тромбоцитов
Методика забора крови должна быть воспроизводима. Тромбоциты м о т стать гиперреакгивными
в различных условиях, включая неправильный забор крови. Измерения, предназначенные для под
тверждения нормальной реактивности тромбоцитов, проводят с помощью агрегометра. Этим методом
определяют пробы тромбоцитов со сниженной реактивностью. Гиперреактивные тромбоциты наагре-
гометре в нормальных условиях испытаний не выявляются. Для того чтобы определить, становятся ли
тромбоциты гиперреактнвными в результате воздействия материала или изделия с кровью, тесты
на агрегацию тромбоцитов модифицируют (уменьшая соответствующим образом концентрацию
тромбо цитов и агрегирующих агентов).
6.3.1.2 Исследование коагуляции
Методы исследования коагуляции основаны на использовании нативной (свежей, без антикоагу
лянтов) цельной кропи, цельной крови с антикоагулянтом (цитратной), богатой тромбоцитами плаз мы
крови или плазмы крови, обедненной тромбоцитами. Большинство стандартизованных методов
исследований коагуляции разработаны с целью определения клинических значимых нарушений свер
тываемости крови, приводящих к задержке тромбообразования или к сильным кровотечениям. Поэто му
чтобы оценить коагуляцию, ускоренную под действием биоматериалов, соответствующим образом
изменяют программу изучения взаимодействия изделия с кропью. Для определения ЛЧТВ рекомендуют
применять такие активаторы, как коалин. целит, эллаговая кислота. Избегают употребления реакти вов с
такими активаторами, поскольку они способны маскировать ускорение коагуляции, вызванное
материалами и изделиями. Исследуемый материал является активатором. Необходимо включать конт
роль без материала.
Кровь подвергают воздействию исследуемого материала либо в неподвижной камере с параллель
ными плоскими ячейками, либо в замкнутой системе, где внутренняя поверхность трубки является
исследуемым материалом. По истечении заданного заранее времени контакта с исследуемой поверхно
стью проводят исследование поверхности соприкосновения изделия гг кропи.
6.3.2 М е т о д ые х v i v o
Методы ex vivo предназначены для изделий, которые предполагают использовать ex vivo, напри
мер изделия, присоединяющиеся извне. Исследования ex vivo также пригодны для изделий; ex vivo не
заменяет имплантацию. Существуют готовые тест-системы для мониторинга адгезии тромбоцитов,
возникновения эмболии, осаждения фибриногена, массы тромбов, адгезия лейкоцитов, убыли тром
боцитов в крови и активации тромбоцитов 1171, |27|, |43|. Скорость кровотока измеряют либо
прибо ром с эффектом Доплера, либо электромагнитным методом. Изменение скорости кропотока
может служить индикатором возникновения тромбов, их размеров, мест отложения, а также
развивающейся эмболии. Для мониторинга взаимодействия изделий с кровыо ex vivo используют
компоненты крови с радиоактивными метками. Чаще всего метят тромбоциты ггфибриноген.
Изменение реактивности тром боцитов при нанесении метки будет минимизировано при более
тщательном соблюдении всех деталей этой процедуры |20|, |2I], |32j.
S