ГОСТ Р ИСО 10993.4-99
Оборудование:
- суховоздушный термостат;
- центрифуга рефрижераторная;
- спектрофотометр или фотоэлсктроколоримстр.
В.3.3 П р о в е д е н и е а н а л и з а
Обшая плошал ьплоских образцов составляет 90 и 120 см- на тест при толщине ев. 0,5 идо 0,5 мм соответ
ственно. Для образцов, площадь которых трудно определить (порошки, гранулы, пористые материалы), берут 6
г материала на тест. Очищенные и тщательно отмытые в физиологическом растворе образцы материала
инкубируют в бюксах с 10 мл физиологического раствора при температуре 37 ’С в течение 30 мин. Затем в
каждый бюкс добавляют по 200 мкл нитратной крови (9:1) кролика или человека, перемешивают и вновь
инкубируют втермостате при температуре 37 ‘С втечение 4 ч. Пекле инкубации проводят отбор проб из бюксов в
центрифужные пробирки.
Пробирки помешают в центрифугу для осаждения крови при ускорении 400 g в течение 15 мин. На
спектрофотометре или фотоэлсктроколоримстрс измеряют оптическую плотность супернатанта в диапазоне
длин волн 530—550 нм.
За количественный критерий метода принимают гемолиз а . который вычисляют по формуле
*
«<
f|00 •
г
f:K
-100.
(В.З)
где /; — оптическая плотность пробы, инкубируемой с исследуемым материалом:
£ — оптическая плотность контрольной пробы (положительный контроль);
£(>1 — оптическая плотность пробы после 100 % гемолиза (отрицательный контроль).
В.4 Количество и морфология алгетнрованных тромбоцитов на поверхности материала
Активация тромбоцитов является одной из определяющих стадий взаимодействия чужеродной поверхно
сти с кровью. К основным характеристикам гсмосовместкмости материалов и изделий на клеточном уровне
относятся количество и степень морфологических изменений адгезироыанных тромбоцитов в условиях in vitro,
определяемые двумя методами. Рекомендуемыми являются методы; радиоизотопный и сканирующая элект
ронная микроскопия.
В . 4 . ( Р а д и о и з о т о п н ы й м е т о д и з м е р е н и як о л и ч е с т в а а л г е т н р о в а н н ы х
т р о м б о ц и т о в
В.4.1.1 Принцип метода
Метод заключается в регистрации количества адгезироваиных на поверхности материалов клеток после
инкубации исследуемых образцов с мечеными радиоактивной меткой тромбоцитами крови человека или кро
лика.
В.4.1.2 Средства контроля
Реактивы:
- 3,8 %-ный раствор натрия цитрата:
- спирт этиловый 96 %-ный;
- радиоактивный "Сг (в виде хроматов и бихроматов);
- 0.85 %-ный раствор натрия хлорида.
Оборудование:
- центрифуга рефрижераторная;
- гамма-счетчик;
- термостат:
- специальные камеры из полиметидметакрилат;
- бокс с ламинарным потоком обеспыленного воздуха:
- встряхивающее устройство;
- микроскоп.
В.4.1.3 Проведение анализа
Нитратную кровь (1:9) центрифугируют при ускорении 400 g в течение 15 мин. Плазму, обогащенную
тромбоцитами, отделяют, проводят мсченис радиоактивным "Сг из расчета 7,4 • 10* Бк на 1 мл и помещают в
термостат при температуре 37 ‘С на 60 мин при постоянном встряхивании. Оставшуюся кровь центрифуги руют
при том же режиме 30 мин для получения бестромбоцитарной плазмы. После инкубации меченые тром боциты
доводят до объема 6 мл бссгромбоцшарной плазмой. Удельная активность полученной меченой тром-
боцитарной плазмы составляет 150—200 имп/(мин • мкл) при концентрации тромбоцитов <6—7) • 10’ мкл*1.
Инкубацию в меченой тромбоштгарной плазме очищенных и тщательно отмытых в физиологическом раство ре
исследуемых и контрольных образцов проводят в камере из полиметилметакрилата, позволяющей без кон такта
инкубационной среды и поверхности материала с воздухом одновременно испытывать в идентичных условиях
10 образцов в объеме инкубационной среды. Рабочая часть камеры представляет собой пять цилинд рических
полостей (диаметр основания 18 мм), соединенных последовательно между собой короткими ии-
19