ГОСТ Р ИСО 10993.4-99
В.1.8 П р о в е д е н и е а н а л и з а
Пробирки с опытными, контрольной и со 100 %-ным гемолизом пробами помещают в термостат на 1 ч
при температуре (37 ± 2) ‘С, после чего центрифугируют в течение 20 мин при частоте вращения 2000 об/мин.
Малосадочную жидкость отделяют для проведения измерении ее оптической плотности.
Оптическую плотность измеряют на фотометре в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 540 нм.
Измеряют оптическую плотность опытной пробы, оптическую плотность положительного контроля и опти
ческую платность отрицательного контроля со 100 %-ным гемолизом.
Гемолиз а , %. вычисляют по формуле
.
а, =■
£1011
100
(B.I)
где £ — оптическая плотность опытной пробы:
Е — оптическая платность контрольной пробы:
£ ( — оптическая плотность пробы со 100 %-ным гемолизом.
Если оптическая плотность контрольной пробы составляет 0.03 и более, результаты всею опыта
считают недостоверными и нс учитывают.
Оптическая плотность пробы со 100 %-ным гемолизом должна быть от 0.8 до 1,0. В случае отклонения от
указанных представ опыт следует повторить с вновь приготовленной эритроцитарной взвесью.
В. 1.9 О и с п к а р е з у л ь т а т о в
Если гемолиз во всех образцах крови менее 2 %, то исследуемая вытяжка свободна от гсмолитичсски
активных веществ, а изделие нс обладает гемолитическим действием.
Если гемолиз хотя бы в одном из образцов крови 2 %и более, то опыт следует повторить. При повторном
получении аналогичного результата вытяжку считают гсмолитичсски активной, и дальнейшие исследования не
проводят.
В.2 Время рскальцификаини плазмы крови в присутствии исследуемого образца
В.2. ( П р и н ц и п м е т о д а
Метод основан на определении времени свертывания ре кальцифицированной плазмы крови кролика
или человека после ее непосредственного контакта с поверхностью исследуемых материалов. Время рекальци-
фикапии. определяемое этим методом, отражает активацию внутренней системы коагуляции, обусловлен
ную контактом крови с поверхностью материала и возможной экстракцией веществ кровью из объема мате
риала.
В.2.2 С р е д с т в ак о н т р о л я
Реактивы:
- 3,8 %-ный водный раствор натрия цитрата;
- раствор хлористого кальция концентрации 0.025 моль/л;
- 0,85 %-ный раствор натрия хлорида;
- спирт этиловый 96 %-ный.
Оборудование — темокоагуломстр.
В.2.3 П р о в е д е н и е а н а л и з а
Очищенные и тщательно отмытые в физиологическом растворе образцы материала и контрольный об
разец (обычно предметное стекло или стеклянные шарики) инкубируют в пластиковых пробирках с нитрат
ной. 1:9 (декальцифицированной) плазмой крови кролика или человека в течение 5 мин при 37 ’С. Исследуе мый
материал берут из расчета 120 см1 или 4 г на 1 мл плазмы крови. Затем пробы по 50—100 мкл плазмы переносят
в реакционные кюветы, добавляют равные объемы раствора хлористого кальция, перемешивают и на
коагулометре измеряют время свертывания при непрерывном перемешивании.
Количественной характеристикой метода является относительное время рскалышфикацки (ОВР), ко
торое вычисляют по формуле
ОВР=bn*.,(В.2)
’к XI
где /я<>— время свертывания плазмы крови в присутствии исследуемого образца, с;
tKU— время свертывания плазмы крови в присутствии контрольного образца, с.
В.З Определение гемолиза при непосредственном контакте материала с кровью
В.3.1 П р и н ц и п м е т о д а
Метод основан на изучении шляния материала на лизис эритроцитов при контакте с кровью.
В.3.2 С р е д с т в ак о н т р о л я
Реактивы:
- 3.8 %-ный раствор натрия нитрата:
- 0.85 %-ный раствор натрия хлорида.