ГОСТР ИСО 7405—2011
В.3.2.3 Обработка срезов дентина
Протравливают предполагаемый «пульпарный» фрагмент среза дентина 50 %-ной лимонной кислоты в тече
ние 30 с. тщательно промывают и стерилизуют либо автоклавированием (121 ’С; 9.6 мПа; 25 мин) в 0.9 %-ном хло
риде натрия, либо погружением в 70 %-ный этанол на 15 мин, затем тщательным промыванием
деминерализованной водой. Дентинные срезы могут храниться в 0.9 %-ном растворе хлорида натрия при
темпера туре (4 ± 2) “С до трех недель Следует убедиться в стерильности дентинных срезов с помощью
микробиологичес кой культуры испытуемой пробы из каждой партии перед использованием.
П р и м е ч а н и е —Толщина среза дентина может различаться в зависимости от глубины клинической по
лости. которую испытание должно смоделировать. Срездентина толщиной (500 ± 50)мкм представляет количество
дентина, остающееся под клинической полостью средней глубины. Более тонкие срезы могут быть использованы
для изображения ситуации а более глубоких клинических полостях.
Срезы дентина могут храниться в 0.9 %-ном хлориде натрия до использования.
В.3.2.4 Сборка перфузии
В.3.2.4.1 Устройство Minucells
Помещают сетку с клетками в опытный прибор и вставляют срез дентина, закрепленный в штативе из нержа
веющей стали.
П р и м е ч а н и е — Подходящий штатив показан на рисунке В.2.
Опрыскивают камеры 0.3 мл среды для количественного определения (питательная среда с 6 г/л буфера
HEPES) каждый час в течение 24 ч. Останавливают перфузию и помещают испытуемый материал в верхнее отде
ление в прямом контакте с «полостной» стороной среза дентина.
После приемлемого периода времени (например. 24 ч или 3 сут) удаляют сетку с клетками из пульлоаой части
камеры и помещают в 48-луночные планшетки, содержащие 0.5 мл предварительно нагретого раствора МТТ (0.5
мл в питательной среде), инкубируют 2 ч при температуре (37 х 2) "С с фосфатно-буферным физраствором.
Экстрагируют осадок синего формазана. используя 0.25 мл диметилсульфоксида. встряхивая планшетки при ком
натной температуре 30 мин. Переносят 200 мкл этого раствора на 96-луночную планшетку и определяют абсор
бцию спектрофотометрическим путем при 540 нм. Выражают результаты как процент контрольных образцов или как
фотометрические показания.
Используют от пяти до 10 камер для каждого материала и контрольного образца в одном испытании и прово
дят каждое испытание по меньшей мере дважды.
В.3.2.4.2 Сборка перфузионной камеры ADA
Устанавливают срез дентина в устройстве перфузионной камеры. Наполняют нижнее отделение приемле
мой клеточной культуральной средой (или другим экстракционным средством) и соединяют его с сосудами подачи
и слива, если необходимо. Затем наполняют испытуемыми материалами. После определенного времени воздей
ствия удаляют клеточную культуральную среду и используют ее для испытания цитотоксичности в обычных
моно-слойных культурах, например используя синтез ДНК. митохондральную активность (анализ МТТ) или
стимуляцию функций, таких как регуляция генов, в качестве биологических конечных точек.
В.4 Контрольные образцы
Используют положительный и отрицательный контрольные образцы для каждого испытуемого вещества. По
ложительный контрольный образец должен сократить жизнеспособность клеток примерно на 50 % после воздей
ствия в 24 ч; отрицательный контрольный образец не должен иметь никакого воздействия на жизнеспособность
клеток. Примеры материалов положительного контроля’1приведены в таблице В.1.
П р и м е ч а н и е — В качестве отрицательного контрольного образца приемлем гидрофобный нетоксич
ный поливинилсилоксановый слепочный материал. В качестве положительного контрольного образца можно ис
пользовать материалы с составами, перечисленными в таблице В.1, или эквивалентные.
’> Следующие сырьевые материалы являются примерами пригодных коммерчески доступных продуктов. Эта
информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является рекламой означенного
изделия со стороны ИСО.
Стеклянный порошок с размером частицы (30 = 10) мкм: Schott, номер для заказа GM35429.
Полиакриловая кислота: Sigma-Aldnch, номер для заказа 323667.
Хлорид дифенилиодония: Sigma, номер для заказа D209082.
Камфорохинон: Sigma, номер для заказа 124893.
Этил-4-диметиламинобензоат: Merck, номер для заказа 841086.
НЕМА (2-гидроксиэтил-метакрилат): Merck, номер для заказа 800588.
24