ГОСТРИСО 7405—2011
П р и м е ч а н и е — Для достоверного испытания под негативным контрольным образцом должен быть рас
положен неповрежденный клеточный слой.
6.2.8 Оценка результатов
При оценке результатов испытания необходимо учитывать всю информацию, полученную в тече
ние испытания, особенно какие-либо различия в результатах опытной и контрольной групп. Клеточный
ответдолжен быть основан на среднем индексе обесцвечивания и индексе лизиса по меньшей мере
че тырех дублирующих испытаний. Клеточный ответ должен быть оценен отдельно по каждому
параметру в соответствии с таблицей 3.
Т а б л и ц а 3 — Клеточный ответ (оценен отдельно для индекса обесцвечивания
и индекса лизиса) и интерпретация цитотоксичности
ШкалаКлеточный ответ
Интерпретация
00
Не цитотоксичный
11
Легкая цитотоксичность
22 — 3
Средняя цитотоксичность
34 — 5
Значительная цитотоксичность
Включают результаты оценки в отчет об испытании.
П р и м е ч а н и е — Необходимо учитывать, что интерпретация данных испытаний клеточной культуры дол
жна принимать во внимание ограничения этой испытательной системы, т.е.. цитотоксичный материал не является
непригодным как таковой, но данные должны быть интерпретированы для каждого конкретного применения.
6.2.9 Отчет об испытании
Представляют результаты в отчете об испытании, который включает полное отражение всех про
веденных процедур, полученных результатов и любыхдругих данных, необходимыхдля оценки резуль
татов. Включают детали приготовления и методов применения испытуемого материала вместе с
номером партии материала, где применимо.
6.3Испытание диффузией через фильтр
6.3.1 Цель
Данное испытание предназначено для демонстрации неспецифичной цитотоксичности испытуе
мых материалов после диффузии через целлюлозоацетатный фильтр.
6.3.2 Клеточная линия
Используют установившуюся клеточную линию фибробластов или эпителия, являющуюся обще
доступной [например, из Американской Коллекции Типовых Культур (АТСС). см.
http://www.atcc.org
].
Обозначают в отчете идентификационный номер клеточной линии, если применимо, описание и назна
чение использованной клеточной линии и обоснование ее выбора.
6.3.3 Культуральная среда, реагенты и оборудование
Готовят культуральную среду иагар или агарозудля использования в качестве верхнего слоя, как
описано в 6.2.3. Готовят растворы либо для окрашивания сукцинатдегидрогеназой, либо для окрашива
ния неслецифичной гидролазой.
Для окрашивания сукцинатдегидрогеназой готовят следующие основные растворы:
a) раствор сукцината, 13.6 г сукцината натрия в 100 мл 0,2 моль/л фосфатного буфера. pH 7.6;
b
) раствор хлорида нитросинего тетразолия. 100 мг хлорида нитросинего тетразолия на 100 мл
0.2 моль/л фосфатного буфера, pH 7.6;
c) раствор феназинметосульфата. 4 мг феназинметосульфата на 10 мл свежей дистиллирован
ной воды.
Готовятокрашивающий раствор 1мл раствора сукцината, 9 мл раствора хлорида нитросинеготет
разолия и 1 мл раствора феназинметосульфата.
Для окрашивания неслецифичной гидролазой готовят основной раствор диацетата флуоресцина,
состоящий из 5 мг диацетата флуоресцина в 1мл ацетона. Для использованиядобавляют20 мкл основ
ного раствора к 100 мл фосфатно-буферного физраствора (например, фосфатно-буферного физрас
твора Dulbecco). Используют чашки Петри диаметром 60 мм. пригодные для культуры тканей.
9