ГОСТРИСО 7405—2011
Р2000 в соответствии с ИСО 6344-1, предварительно поместив их на материал противокислородной за
щиты.
6.2Испытание диффузией в агар
6.2.1 Цель
Данное испытание предназначено для демонстрации неспецифичной цитотоксичности испытуе
мых материалов после диффузии через агар или агарозу. Данный метод испытания не применим для
вымываемых веществ, которые не диффундируют через агар или агарозу.
6.2.2 Клеточная линия
Используют установившуюся клеточную линию фибробластов или эпителия, являющуюся обще
доступной [например, из Американской Коллекции Типовых Культур (АТСС), см.
http://www.atcc.org]1’
.
Обозначают в отчете идентификационный номер клеточной линии, если применимо, описание и на
значение использованной клеточной линии и обоснование ее выбора.
6.2.3 Культуральная среда, реагенты и оборудование
Используют культуральную среду, указанную для выбранной клеточной линии. Стерилизуют фи
льтрацией. Для приготовления агара готовят двойную концентрацию культуральной среды. Стерилизу
ют фильтрацией. Готовят либо 3 %-ныйагар, либо 3 %-нуюагарозу. Стерилизуютавтоклавированием.
Готовят витальный краситель разведением основного раствора 1 %-ного водного раствора ней
трального красного (регистрируют источник) 1:100 посредством 0.01 моль/л 100 мл фосфатно-буфер
ных физрастворов [например, фосфатно-буферного физраствора Dulbecco2’) немедленно перед
использованием. Хранят растворы нейтрального красного в темном месте. Используют 6-луночные
планшетки для культуры тканей (диаметром 35 мм) или чашки Петри номинальным диаметром от 50 до
100 мм. пригодные для культуры тканей.
6.2.4 Приготовление проб
Готовят пробы в соответствии с 6.1. Исследование проводят на экстракте материала и/или самом
материале, согласно руководству в ИС010993-5.
a) Для твердых материалов готовят круглые испытуемые пробы диаметром примерно 5 мм с
плоской поверхностью для обеспечения адекватного контакта с верхним слоем агара.
b
) Для застывающих материалов вводят свежесмешанный материал в кольца внутренним диа
метром 5мм и высотой 2мм. Материал кольцадолжен быть указан в отчетеоб исследовании. При испы
тании материалов всвежесмешанном состоянии помещают кольца наагар до введения материала. При
испытании после различных периодов застывания наполняют кольца так. чтобы материал находился
вровень с кромкой, и дают ему застыть при температуре (37 ± 2) °С и относительной влажности (90
1
10) % до готовности для испытания.
c) Для жидких используемых проб или экстрактов впитывают 0.01 мл жидкости в боросиликатный
тонкостекольный фильтровый диск диаметром 5 мм. помещенный на агар.
П р и м е ч а н и я
1 Подходящими инертными материалами являются стекло или PTFE.
2 Подходящие диски могут быть приготовлены из предфильтров.
6.2.5 Контрольные образцы
Используют положительные контрольные образцы, отрицательные контрольные образцы и эта
лонные материалы.
6.2.6 Процедура испытания
Культивируют клетки, пока они не достигнут конца фазы логарифмического роста. Пипетируют
надлежащий объем (например, 10 мл для 100-миллиметровой чашки Петри) клеточной суспензии
(2.5х 10“ клетки/мл) в достаточное число чашек Петри и инкубируютпри температуре (37 ± 2) °С в водо-
насыщеннойатмосфере с 5 % (объемнаядоля)углекислого газа в течение 24ч. Если используютдругие
условия культивирования клеток, необходимо предоставить обоснование.
11 Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является рекламой
означенного изделия со стороны ИСО. Возможно использование эквивалентных продуктов, если доказано, что они
приведут к тем же результатам.
Dulbecco является торговым наименованием. Эта информация приведена дпя удобства пользователей
настоящего стандарта и не является рекламой означенного изделия со стороны ИСО. Возможно использование эк
вивалентных продуктов, если доказано, что они приведут к тем же результатам.
7