ГОСТР ИСО 7405—2011
Нагревают стерильный агар или агарозудо температуры 100 °С на водяной бане идают остытьдо
температуры 48 °С.
Смешивают одну часть агара или агарозы с одной частью свежеприготовленной культуральной
среды двойной концентрации и нагревают до температуры 48 °С. Аспирируют жидкую культуральную
среду из каждой чашки Петри изаменяют 10 мл свежеприготовленной смесью агара или агарозы икуль
туральной среды.
Дают смеси агара или агарозы и культуральной среды затвердеть при комнатной температуре
(примерно 30 мин). Добавляют 10 мл раствора нейтрального красного и держат в темноте от 15 до 20
мин. Аспирируют избыточный раствор нейтрального красного. Защищают культуру от света в присут
ствии нейтрального красного, так как клетки могут быть повреждены.
Вносят в каждую чашкунеобходимоечисло проб испытуемого материала и контрольных образцов
с адекватным расстоянием (больше 20 мм) между соседними пробами, если применимо. Инкубируют
при температуре (37
i
2) °С в водонасыщенной атмосфере с 5 % (объемная доля) углекислого газа в те
чение 24 ч. Осматривают каждый испытуемый материал, по меньшей мере, четыре раза (т.е., две
чашки на испытуемый материал).
6.2.7 Параметры оценки
Оценивают зону обесцвечивания вокруг испытуемых материалов и контрольных образцов, используя
инвертированный микросхоп с калиброванным экраном, и определяют индекс обесцвечивания ииндекс ли
зиса для каждой испытуемой пробы в соответствии с критериями, приведенными в таблицах 1 и 2.
Т а б л и ц а 1 — Индекс обесцвечивания
Индекс
обесцвечивания
Описание
0
Без обнаруживаемой зоны обесцвечивания вокруг и под препаратом
1
Зона обесцвечивания ограничена областью вокруг препарата
2
Зона обесцвечивания выходит менее чем на 0.5 см за пределы препарата
3
Зона обесцвечивания занимает от 0.5 до 1,0 см за пределами препарата
4
Зона обесцвечивания занимает более чем 1.0см за пределами препарата, но не включа
ет всю чашку
S
Зона обесцвечивания включает всю чашку
Т а б л и ц а 2 — Индекс лизиса
Индекс лизиса
Описание обесцвеченной зоны
0
Без наблюдаемой цитотоксичности
1
Затронуто < 20 % обесцвеченной зоны
2
Затронуто 20 % до < 40 % обесцвеченной зоны
3
Затронуто 40 % до < 60 % обесцвеченной зоны
4
Затронуто 60 % до 80 % обесцвеченной зоны
5
Затронуто < 80 % обесцвеченной зоны
Вычисляют средний иодекс обесцвечивания и индекс лизиса отдельно для каждого испытуемого
материала. Если значения индексадля четырех репликатов испытуемого вещества различаются более
чем на 2 единицы в диапазоне 0до 3. повторяют испытание. При индексах 4 и 5 повторения не требует ся.
При испытании экстрактов следует вычесть средний индекс одной экстракционной среды из средне го
индекса экстракционной среды, содержащей испытуемое вещество, для получения индекса только
испытуемоговещества. Если средний индексэкстракционной среды, служащей контрольным образцом,
больше 1, повторяют испытание, используя другую экстракционную среду.
8