ГОСТ Р ИСО 10993-4—2009
лазон регистрируемых концентраций недостаточно широк(от 5 до 50 мг/л)|73]. и в исследуемом образце может при
сутствовать ряд агентов, способных ингибировать (до 40 %) (74) реакцию окисления под действием перекиси,
антикоагулянты, комплексообразующие с кальцием (цитраты, оксалаты. ЭДТА) (73|. альбумин (75J или другие
неспецифические компоненты плазмы (74).
Таким образом, прямые оптические методы, такие как методы Harboe (76). Crlpps (77) или Taulier (78) ссравни
мой чувствительностью и воспроизводимостью, могут быть заменены. Однако, как уже было отмечено выше, хими
ческие превращения гемоглобина и вызванные ими изменения его спектра могут искажать результаты в пробах
на определение гемоглобина. Более того, необходимо вводить поправки, компенсирующие фоновую
составляющую плазмы крови, способную влиять на вид спектра поглощения гемоглобина (72). Исследователи
должны хорошо понимать существование ограничений методов определения гемоглобина и осведомляться об
их наличии при использовании конкретной методики (64). (65). (72). (75). Это включает в себя и исследование
супернатанта на пред мет присутствия осадков и его спектра (с 400 до 700 нм) со спектром чистого гемоглобина.
С.6.1.3.2 Иммунонефелометрический метод
Иммунонефелометрический метод основан на регистрации гемоглобина плазмы методом нефелометрии с
использованием коммерчески доступных антител. Этот метод пригоден для проведения рутинных работ. Он хоро шо
коррелирует и сопоставим с данными, полученными в случае применения оптических методов (79).
С.6.2 Консервация крови и ее компонентов
В этом разделе освещены лучшие способы сохранения крови и ее компонентов, рекомендованные
Американской Ассоциации Банков Крови (80)и Совета Европы (81). В целом, материалы и изделия следует тестиро
вать с использованием крови, с химическими кондициями, имитирующими те. в которых изделие будет эксплуати
роваться в клинике (выбор соответствующего антикоагулянта; минимальное использование консервантов;
значения pH. соответствующие физиологическим (63)).
Растворы антикоагулянтов были разработаны для того, чтобы предотвращать свертывание крови при ее
заборе, что позволят сохранять эритроциты в течение определенного времени. Все эти растворы содержат цитрат
натрия, лимонную кислоту и глюкозу. Некоторые растворы дополнительно содержат аденин, гуанозин. маннитол.
сахарозу, сорбитол и/или фосфаты (82). (83). (84). (85). (86). (87). Хотя гепарин не используют для сохранения крови,
его часто применяют в качестве антикоагулянта в клинике для пациентов, подвергаемых воздействию медицинских
аппаратов и изделий.
Свертывание крови предотвращается за счет связывания цитратом ионов кальция. Во время хранения эрит
роциты метаболизируют глюкозу. Две молекулы аденозинтрифосфата (АТФ) генерируются фосфорилированием
аденозиндифосфата (АДФ) на каждую молекулу глюкозы, метаболизированную в анаэробном цикле гликолиза
Эмбдена-Мейерхофа. Молекулы АТФ поддерживают энергетические потребности эритроцитов по поддержке упру
гости мембран и определенных функций мембранного транспорта. Превращение АТФ в АДФ сопровождается
выделением энергии, необходимой для поддержки этих функций. Для продления времени хранения раствор анти
коагулянта должен быть подкислен, что обеспечивает достаточно высокую концентрацию ионов водорода в
начальные моменты хранения при температуре 4 ’С. Повышение кислотности во время хранения снижает интен
сивность гликолиза. Аденозиновые нуклеотиды (АТФ, АДФ. АМФ) истощаются во время хранения, поэтому введе
ние аденозина в раствор антикоагулянта позволяет синтезировать замену АМФ. АДФ и АТФ.
В процессе приготовления эритроцитарного концентрата значительные части глюкозы и аденина удаляются
вместе с плазмой. Достаточная жизнеспособность эритроцитов после удаления плазмы может быть достигнута в
случае, если клетки излишне не концентрированны. Нормальный цитрат фосфат декстроэный (ЦФД)-аденин кон
центрат эритроцитов должен иметь объем фракции эритроцитов не выше 0,8. Даже если удалить 90 % плазмы, жиз
нестойкость эритроцитов может быть поддержана введением добавок или суспензионных сред. Хлорид натрия,
аденин и глюкоза необходимы для жизнестойкости, в то время как аденин и глюкоза могут быть применены для
дальнейшей стабилизации клеточных мембран и предотвращения гемолиза (80).
Пригодность контейнеров для хранения продуктов крови оценивают различными методами, измеряющими
качество продуктов крови (70). (83). Контейнер с продуктами крови, содержащими подходящий антикоагулянт, хра
нят при температуре от 1 ‘С доб ‘С в статике. Через определенные промежутки времени определяют концентрацию
свободного гемоглобина плазмы, чтобы определить жизнеспособность и качество сохраняемого продукта.
Качество сохраняемого продукта может быть повышено аккуратным перемешиванием один раз в неделю. Оценку
хранения в контейнере косвенно определяют по выделению из контейнера двуокиси углерода, генерируемой эрит
роцитами в процессе жизнедеятельности в отсутствии факторов перемешивания.
С.6.3 Защита персонала при работе с кровью
Для защиты персонала, получающего, транспортирующего и работающего с потенциально инфицированной
кровью человека, необходимо наличие письменных инструкций. Потенциально инфицированные материалы вклю
чают в себя кровь идругие продукты и жидкости организма, оборудование, контактирующее (или потенциально спо
собное контактировать) с кровью и другими жидкостями организма, а также материалы, используемые при
культивировании организмов, вызывающих переносимые с кровью инфекции [88].
С.6.4 Забор крови (флеботомия)
Поскольку при заборе крови невозможно гарантировать 100 %-ную стерильность поверхности кожи, должна
существовать строгая, стандартизованная процедура подготовки рабочей области для флеботомии. Прежде чем
21