ГОСТ Р ИСО 10993-4—2009
В.2.6 Сканирующая электронная микроскопия (СЭМ)
Пояснение и интерпретацию проводят в соответствии с В.2.4. Этот метод имеет преимущество перед свето
вой микроскопией (см. В.2.4). так как дает более подробную информацию относительно тонкой структуры изучае
мых компонентов. Выводы о количественных характеристиках требуют достаточного числа повторных
определений, что позволило бы установить степень воспроизводимости результатов.
В.2.7 Связывание антител
Вслед за качественной оценкой отложений фибрина и тромбоцитов с использованием микроскопа возможно
проведение количественных определений этих параметров с использованием антител, специфических к фибрино
гену и рецепторам мембран тромбоцитов. Для удаления компонентов крови, слабо связанных с поверхностью,
исследуемые образцы перед взаимодействием с антителами следует тщательно промыть.
В.2.8 Исследование трансплантированного при аутопсии
Метод имеет важное значение для оценки биологической реакции организма на имплантированное изделие.
Распределение, размеры и микроскопическую природу клеточных отложений можно наилучшим образом опреде
лить при патологоанатомическом исследовании. Некоторые предлагаемые процедуры опубликованы [40). (41).
В.2.9 Исследование дистальных органов при аутопсии
Цель исследования — изучение влияния имплантированных изделий на дистальные органы. Среди возмож
ных эффектов — тромбоэмболия, инфекция и закупорка изделия.
В.2.10 Ангиография, внутрисосудистый ультразвук. Допплеровский ультразвук, сцинтилляционная
томография, магниторезонансная томография
Один или комбинация из данных методов может быть применен для определения наличия просвета или сте
пени сужения сосудистого протеза или другого канала, а также для определения тромбообрвзования не стенках
изделия во время их функционирования т vivo.
В.З Коагуляция
Коагуляционные методы основаны на использовании нативной (свежей, без антикоагулянтов) цельной кро
ви. цельной крови сантикоагулянтами (обычно — цитратной). плазмы, обогащенной тромбоцитами, ибестромбо-
цитарной плазмы.
Так как большинство стандартных коагуляционных тест-наборов предназначены для обнаружения наруше
ний в функционировании системы свертывания, что приводит к замедлению свертывания или повышенной крово-
потере. протоколы исследования взаимодействия изделие.’кровь должны быть изменены так. чтобы подходить для
регистрации ускорения тромбообрвзования.индуцированногоконтактом с биоматериалами. Тесты, основа иные на
активированном частичном тромбопластине. включают в себя такие активаторы, как каолин, целит или
элагровую кислоту. Тест-комбинаций. содержащих такого рода активаторы, следует избегать, поскольку их
применение мас кирует ускорение коагуляции, вызванное контактом с материалом или изделием.
Кровь инкубируют с исследуемым материалом как в статических условиях (ячейка с параллельными пласти
нами). так и в системе с замкнутой циркуляцией, где исследуемым материалом является внутренняя поверхность
трубок. После определенного времени инкубации проводят тестирование как поверхности, так и крови (54).
В.3.1 Частичное тромбопластиновое время (ЧТВ)
Частичное тромбопластиновое время (38) — это время образования сгустка в рекальцифицированной цит
ратной плазме при добавлении частичного тромбопластина. Частичный тромбопластин — фосфолипидная
взвесь, которую обычно экстрагируют из тканевого тромбопластина. гомогената мозга или легкого млекопитающих.
Сокращение ЧТВ. возникающее при контакте с материалами в условиях применения в медицинской практике, ука
зывает на гиперкоагуляцию, и его рассматривают как фактор опасности тромбозов. Удлинение ЧТВ предполагает
дефицит каких-либо факторов свертывания крови (за исключением факторов VII и XIII): I (фибриноген), II (протром
бин). V. VIII. IX. X. XI или XII.
Гепарин и другие антикоагулянты также увеличивают ЧТВ.
В продаже имеется набор реактивов для определения частичного тромбопластинового времени, в который
входят различные активные вещества, такие каккоалин или целит. Тест-набор, в котором используют эти реактивы,
называется «Тест активированного парциального (частичного) тромбопластинового времени» (АЧТВ) Тест непри
меним для оценки взаимодействия между кровью и изделием in vitro, поскольку активирующие вещества маскируют
активацию, вызванную изделием или входящими в его состав материалами.
В.3.2 Протромбиновое время (ПВ)
Этот тест основан на том. что в тщательно измеренном объеме плазмы крови имеется оптимальная концен
трация ионов кальция и избыток тромбопластина, и переменные величины — концентрация протромбина и допол
нительные факторы (38). Не рекомендуется использовать оксалат в качестве антикоагулянта, поскольку фактор V
менее стабилен в этом растворе, что приводит к увеличению протромбинового времени. Этот тест позволяет опре
делять протромбин и дополнительные факторы. В присутствии тканевого тромбопластина время образования
сгустка зависит от концентрации протромбина, факторов V. VII и X (при условии, что фибриноген, фибринолитичес кая
и антикоагулирующая активность в норме). Увеличение протромбинового времени обычно указывает на дефи цит
протромбина или факторов V, VII. X или фибриногена.
Этот тест имеет значение только для оценки имплантируемых изделий.
14