ГОСТ Р ИСО 10993-4—2009
В.3.3 Тромбиновое время (ТВ)
Тромбиновое время (38J — время свертывания плазмы при добавлении раствора тромбина со стандартной
активностью. Тромбиновое время увеличивается при дефиците фибриногена (ниже 100 мг/л), при аномалиях в
молекуле фибриногена и при повышении уровней продуктов деструкции фибриногена и фибрина (ПДФ)или гепари на.
Обычно тест проводят дпя оценки имплантируемых изделий.
В.3.4 Генерация тромбина
При взаимодействии с материалами интактная система свертывания в присутствии фосфолипидов
(См. В.3.1.) генерирует тромбин, который может быть количественно измерен по конверсии хромогенмого субстра
та. Данный метод имеет гораздо более низкий разброс результатов по сравнению с обычными коагуляционными
тестами.
В.3.5 Фибриноген
Дисфибриногенемия. афибриногенемия и гипофибриногенемия вызывают увеличение ЧТВ. ПВ и ТВ (21).
Скрининговый тест ТВ наиболее чувствителен к дефициту фибриногена. Если требуется точный показатель фибри
ногена. рекомендуется модифицированный тест ТВ «Рептилазовое время», тест-набор которого также имеется в
продаже.
Тест имеет значение только для оценки имплантируемых изделий.
В.3.6 Продукты деструкции фибриногена и фибрина (ПДФ)
Нормальное растворение фибрина происходит с образованием X. У. С. D и Е фрагментов в концентрации
менее 2 мкг/мп плазмы. Нормальный низкий уровень ПДФ достигается при низкой скорости реакции расщепления и
высокой скорости выхода ПДФ в кровь. Патологическая деструкция фибриногена и фибрина, результат повышен
ной активности плазминогена, дает ПДФ в концентрации от 2 до 40 мкг/мл и бопее. Тест имеет значение лишь дпя
оценки имплантируемых изделий. Рекомендуется использование коммерчески доступных методов (51). (52).
В.3.7 Исследование специфических факторов свертывания крови
Значительное снижение содержания факторов свертывания крови (например, менее 50 % нормального или
контрольного уровня), возникающее е результате воздействия материала или изделия в условиях применения в
медицинской практике, предполагает ускоренный расход этих факторов в процессе абсорбции, коагуляции или в
процессе других механизмов.
В.3.8 FPA. D-димер, F1<2,TAT
Повышение уровня ФПА. D-димеров или F, +г является показателем активности механизмов свертывания
крови. Увеличение концентрации ТАТ указывает на усиление процесса свертывания крови и формирование ком
плекса между генерируемым тромбином и циркулирующим антитромбином. О-димер — продукт деградации разла
гаемого ллазмином полимеризованного фибрина (фактора XIII). Рекомендуется использование твердофазного
иммунофермвнтного анализа (ELISA) и радиоиммуноанализа (RIA).
В.4 Тромбоциты и их функции
Особенно важно избегать активации тромбоцитов а процессе приготовления суспензии клеток.
В.4.1 Подсчет числа тромбоцитов
Подсчет числа тромбоцитов является очень важным из-за их ключевой роли в предотвращении возможного
кровотечения (21). (49), (59). Значительное снижение числа тромбоцитов в крови, подверженной воздействию изде
лия. можетбыть вызвано процессами объемной и поверхностной агрегации клеток, их депонированием (например, в
селезенку) или коагуляцией крови на материалах или изделиях. Уменьшение числа тромбоцитов во время функ
ционирования имплантируемого изделия может быть вы звано ускоренным разрушением или удалением тромбоци тов
из системы кровообращения. Подсчет числа тромбоцитов проводят в среде для суспендирования на основе ЭДТА.
Техника забора крови должна быть воспроизводимой. Агрегатометрия является тестом, подтверждающим
нормальную реактивность тромбоцитов. Манипуляции с кровью, сопровождающиеся снижением активности тром
боцитов. могут быть легко обнаружены агрегатометрией. Однако под воздействием разнообразных условий, вклю
чая неправильный забор крови, тромбоциты способны переходить в гиперактивное состояние, которое плохо
определяется с применением агрегометра. Агрегационные тесты следует модифицировать (подбором концентра
ции тромбоцитов и агрегирующих агентов) так. чтобы модифицированные методы способны были регистрировать
гиперактивность тромбоцитов, в том числе проявившуюся в результате контакта с материалами или изделиями.
В.4.1.1 Подсчет тромбоцитов вручную
В некоторых клинических лабораториях подсчет тромбоцитов проводят вручную, несмотря на доступность
приборов для подсчета тромбоцитов, обладающих высокой точностью (В.4.1.2).
В.4.1.2 Автоматизированный счет тромбоцитов в цельной крови и в тромбоцитарной плазме
Автоматизированный подсчет тромбоцитов можно проводить либо в хорошо перемешанной цельной крови,
либо в тромбоцитарной плазме. Использование цельной крови предпочтительнее, так как использование тромбо
цитарной плазмы дает менее точные результаты. Автоматизированный подсчет тромбоцитов проводят на боль
шем числе клеток, чем при подсчете вручную. Следовательно, разброс для автоматизированного счета может
составлять всего 4 %. в то время как наилучший достижимый показатель для подсчета вручную составляет 11%.
Большинство приборов обладают способностью отличать тромбоциты от мелких частиц небиологического проис
хождения. что исключает необходимость визуально распознавать и дифференцировать осколки тромбоцитов.
15