ГОСТ Р ИСО 10993-4—2009
В.4.2 Агрегация тромбоцитов
Агрегацию тромбоцитов [38J вызывает добавление к тромбоцитарной плазме при постоянном перемешива
нии агрегирующих агентов (например, АДФ, эпинефрин, коллаген, тромбин и др.). По мере того, как происходит
агрегация тромбоцитов, плазма становится асе светлее. Оптическую систему применяют для определения
измене ния трансмиссии света, а регистрирующее устройство графически изображает изменение трансмиссии
света, начиная с базовой установки (на значение *<Ь). Замедленная или слабая агрегация тромбоцитов
может быть вызвана активацией тромбоцитов и высвобождением содержащихся гранул, увеличением
показателя ПДФ или определенными лекарственными препаратами (например, аспирином, нестероидными
противовоспалительными средствами). Важно учитывать, что у некоторых животных агрегация тромбоцитов
может варьировать или отсу тствовать. когда используют отдельные агенты. Спонтанная агрегация
тромбоцитов, происходящая в отсутствие ее индукторов, является патологическим процессом, указывающим на
активацию тромбоцитов. Агрегация тромбо цитов может быть зарегистрирована автоматически с использованием
метода WU/HOAK [52].
В.4.3 Адгезивность клеток крови
Адгезивность клеток крови (34] — один из показателей совместимости материала с кровью. Чем меньше
адгезированных клеток крови, тем более совместимы поверхность материала и кровь.
Разработаны различные методы измерения адгезивности клеток на поверхности, например. К-счет Куники
(KumkiK-score)(53). Большинство этих методов основано наследующем наблюдении: определенная часть тромбо
цитов удаляется из нормальной цельной крови в результате прохождения через колонку со стеклянными шариками в
условиях контролируемого потока идавления. Этот принцип был применен для качественной оценки адгезии дру гих
клеток крови на полимеры, которыми покрыты стеклянные шарики. Благодаря применению этого метода, был
сделан вывод (34].что адгезия периферических лимфоцитов и полиморфонухлеарных лейкоцитов (PMNs) собак на
стеклянные шарики, покрытые полигидроксиэтилметакрилатом (рНЕМА), ниже, чем на стеклянные шарики, покры
тые полистиролом и некоторыми другими полимерами. В этом исследовании использовали изолированные лимфо
циты и PMNs.
В качестве альтернативного метода можно предложить подсчет числа тромбоцитов, адгезированных на
исследуемую поверхность. Вслед за воздействием крови а условиях применения в медицинской практике исследу
емую поверхность промывают, чтобы удалить неадгезироаанные клетки, высушивают и готовят к световой или
к сканирующей электронной микроскопии. Подсчитывают число адгезированныхтромбоцитов на единицу площади
и отмечают их морфологические особенности (общее число тромбоцитов и число агрегатов тромбоцитов). Можно
также использовать тромбоциты, меченные изотопами 5’Сг и ,п 1п (33]. [55]. (56].
В.4.4 Активация тромбоцитов
Использование определенных материалов и изделий может вызывать активацию тромбоцитов, которая
сопровождается:
a) высвобождением из внутриклеточных гранул ряда веществ (T®-4,p-TG. серотонина и др.):
b
) изменением морфологии тромбоцитов;
c) образованием микроагрегатов тромбоцитов.
Активированный тромбоцит протромбогенен. Активация тромбоцитов может быть оценена с помощью мик
роскопических (световая и электронная) методов, поточной цитометрией (определение наличия микроагрегатов),
регистрацией уровня ТФ-4 и p-TG. выделения Р-селектина (GMP-140) или активированных гликопротеинов (GP lb и
GP НЬ/Ша) с использованием моноклонильных антител. Различные эпитопы активированных тромбоцитов могут
быть оценены с использованием двух или более антител (например, одно — к GP lb или GP llb/llla, а другое — к Р-
селектину). регистрация с помощью поточной цитометрии (60].
8.4.5 Время кровотечения
Коммерческая доступностьстерильного одноразового устройства, предназначенного для проведения разре
за кожи стандартных глубины и длины в стандартных условиях, значительно повысила воспроизводимость и цен
ность этого испытания. Увеличение времени кровотечения указывает на сниженную функцию тромбоцитов или
уменьшение числа тромбоцитов, которое может быть определено по В.4.1. Увеличение времени кровотечения при
нормальном числе тромбоцитов наблюдается при взаимодействии с некоторыми внешними присоединяемыми
устройствами кратковременного действия (например при экстракорпоральном кровообращении) (31]. Испытание
может быть проведено на некоторых видах подопытных животных. Измерение времени кровотечения применимо в
условиях И)vitro.
В.4.6 Анализ ф ункциональных свойств тромбоцитов
Принцип классического стандартного времени кровотечения был использован для автоматизированного
анализа. Цельную кровь прокачивают через коллагеновый фильтр сдиаметром апертуры (отверстия в измеритель
ной ячейке) в 150 микрон. Тромбоциты адгезируют и агрегируют до тех пор, пока они не закроют просвет апертуры.
Давление крови и температуры фиксированы, присутствие антикоагулянтов не влияет на результаты теста. Тест
применим для крови животных.
В.4.7 Гамма-из лучение тромбоцитов, меченных радиоизотопами
Высокая эмиссия гамма-излучения, свойственная ’ ’ ’ in. позволяет использовать его для этой цели (23]. (30].
Этот метод дает возможность определения локализации тромбоцитов на поверхности изделия и проведения их
16