ГОСТ Р 52687—2006
8.18.5.2 Продукт во вскрытой таре тщательно перемешивают.
8.18.5.3 Из каждой единицы потребительской тары после тщательного перемешивания пипеткой
отбирают 2 пробы по 10 см3продукта и каждую пробу помещают в стерильную колбу. К каждой пробе
добавляютпо 1,0 см3стерильного раствора натрия гидрокарбоната с массовой концентрацией 100 г/дм3.
Содержимое тщательно перемешивают с использованием стерильных приспособлений или на шут-
тель-аппарате. Для получения первого разведения продукта вкаждую колбу добавляют физиологичес
кий раствор до достижения общего объема пробы 100 см3, после чего смесь опять тщательно
перемешивают. Полученная смесь — первое разведение продукта — 10-1.
8.18.5.4 Последующиедесятикратные разведения продуктаготовят, добавляя в9 см3физиологи
ческого раствора, налитого в стерильную пробирку, по 1 см3 предыдущего разведения продукта. Для
приготовления каждого разведения берутновую стерильную пипетку. Вседьмой пробирке продукт будет
разведен в 10®раз.
8.18.5.5 Готовят два ряда питательных сред, каждый по пять пробирок, содержащих среду Блау-
рокка илидругуюсреду вколичестве 10 см3длявысева вних соответствующих разведений исследуемо
го продукта. Перед употреблением средуследует разогреть на кипящей водяной бане втечение 15 мин
для снижения в ней содержания растворенного кислорода. При использовании плотных
питательных сред перед проведением анализа ихследует разогреть в кипящей водяной бане до
полного расплавле ния агара. В момент использования температура питательных среддолжна
составлять (38 i 1) ®С.
8.18.5.6 Внесение посевного материала впитательную среду начинают с последнегоразведения,
внося впоследнюю пробирку каждого из 2 рядов среды по1 см3разведения продукта 1-10—®.затемтаким
же образом вносят по 1 см3разведения продукта 1•10~7, 1•10-6 . 1■10~5и 1-10-4 . Первая пробирка каж
дого ряда будет содержать разведение продукта 1■10~\ а последняя — 1■10~8. При внесении разведе
ний продукта впитательную среду проводят тщательное перемешивание пипеткой, а затем круговыми
движениями руки или с помощью шуттель-аппарата, имитирующими центрифугирование.
Для каждого посева берут новуюстерильную пипетку.
Для инкубации пробирки с посевами исследуемых проб выдерживают в термостате с температу
рой (37
1
1) °С втечение (72
1
1) ч.
8.18.6 Обработка результатов
8.18.6.1 По окончании инкубации учитывают последние пробирки, в которых выросли колонии,
типичные для бифидобактерий — ввиде «гвоздиков», «тяжей», иногда ввиде «полос»; вплотных пита
тельных средах-в виде крупных«дисков» или «гречичного зерна», изаписывают разведениеучитывае
мой пробирки. Выросшие колонии подсчитывают.
8.18.6.2 Подтверждение наличия бифидобактерий осуществляют методом микроскопирования.
Из пробирки последнего разведения, давшего рост не менее 10 типичных колоний, и из пробирки
последующего разведения (без видимого роста типичных колоний бифидобактерий) готовят мазки,
окрашенные поГраму или метиленовым голубым. При приготовлении препарата на чистое предметное
стекло наносят петлей материал из колонии или небольшую каплю предварительно суспендированного
исследуемого материала и распределяют его на площади около 1 см2. Препарат высушивают при ком
натной температуре, фиксируют на пламени горелки. Окрашивают по Граму или красят метиленовым
голубым. Бифидобактерии окрашиваются по Граму положительно. В мазках имеют вид тонких прямых
или слегка изогнутых палочек с бифуркацией на одном или обоих концах, или без нее. Располагаются
группами в виде снежинок, английской буквы V или скоплений в виде иероглифов. Иногда могут иметь
вид тонких мелкозернистых палочек.
Поскольку исследуемые продукты являются кисломолочными, вмазках взависимости от видапро
дукта присутствуют заквасочные микроорганизмы (молочнокислые стрептококки и палочки), а также
могут присутствовать клетки дрожжей.
При обнаружении бифидобактерий методом микроскопирования мазков, взятых из пробирки того
разведения, в котором не были отмечены типичные для бифидобактерий колонии, фиксируют степень
этого разведения.
8.18.6.3 Обработка результатов определения
Количество бифидобактерий ванализируемом продуктеX. КОЕ/r. вычисляют поформуле
X = а10я,
где а — среднеарифметическое количество колоний бифидобактерий впоследнем, засеянном в двух
рядах разведений продукта. КОЕ/см3(г);
10 — коэффициент кратности разведения продукта;
п — показатель последнего разведения продукта, вкотором отмечен ростбифидобактерий.
14