ГОСТ Р ИСО 11134-2000
ленного логарифмического уровня. Относительная устойчивость и популяция используемого контрольного
микроорганизмадолжнасравниваться со средним числом и термоусгойчивосгыо микроорганизмов —типичных
представителей бионагрузки продукта. Сравнение должно показать, что предварительно определенный уровень
микробиологических имитаторов дает уверенность в том. что желаемый уровень вероятности выживания
бионагрузки достигнут. Этот метод основан на бионагрузке. Следовательно, вычисление бионагрузки и
определение устойчивости должны проводиться так же. как при абсолютном методе бионагрузки.
Л.6.4 Стерилизованная продукция нс должна храниться в помещениях с большими перепадами влажнос
ти, лаатсния и температуры.
А.6.5 Эффект стерилизации влажным теплом выражается вероятностной функцией тепловой энергии,
времени, влажности, числа микроорганизмов, находящихся в продукте (бионагрузки) и термоустойчивости этих
микроорганизмов.
А.6.6 Для демонстрации устойчивости к воздействию влажного тепла с учетом бионагрузки используют
следующие виды споровых микроорганизмов: Clostridium spomgenes, Bacillus coagulant, В. subtilis и В. stearother-
maphilus.
Необходимо принимать в расчет такие факторы, как захват микроорганизмов продукцией, контакт
продукции с загрязненными жидкостями во время производства и/или использование материалов, которые
могут поддерживать рост микроорганизмов.
Количество выявленных сохранившихся после обработки теплом жизнеспособных спор может колебаться
в зависимости от времени между обработкой и культивированием от условий культивирования. Следовательно,
такие условия должны тщательно контролироваться и документироваться.
Метод избыточного воздействия основан на том. что процесс стерилизации приводит к инактивации
биологических индикаторов с учетомдополнительного коэффициента безопасности. Биологический индикатор
состоит из определенного числа (например, между 10’ и К)4) устойчивых к влажному теплу спор. Популяция
индикатора необязательно должна соответствовать бионагрузке. Если продукт требует условий сухого тепла, то
следует также использовать такие микроорганизмы как В. subtilis 5230 или В. subtilis var. niger (АТСС 9372).
Условия стерилизации для инактивации биологического индикагора методом избыточного воздействия более
строгие, чем те, которые требуются для гибели бионагрузки.
Характеристики температуры и влажности многих систем могут отличаться от тех, которые имеют место
в растворе. Результирующая скорость инактивации микроорганизмов может отставать. В некоторых случаях
достижение аффекта инактивации биологического индикатора, соответствующего величине 12D.
требует избыточного термического воздействия.
Устойчивость биологического индикатора может быть определена с помощью фракционирования време
ни воздействия с оценкой степени летальности как функции предложенных параметров процесса. Степень
легальности может быть измерена проращиванием и подсчетом выживших микроорганизмов с целью
постро ения кривой скорости отмирания или применением анализа конечной точки, когда используются
методы тестов стерильности. В последнем случае время воздействия выбираюттаким образом, что самые
короткие экспозиции дают рост всех проб, самые продолжительные экспозиции нс дают роста, а
промежуточные экспозиции дают рост в некоторых пробах.
А.6.7 Биологические индикаторы широко используют для оценки летальности различных комбинаций
параметров процесса, продуктов и упаковок. Системы биологических индикаторов с известной устойчивостью
прямо измеряют фактическую летальность в определенных местах продукта как результат использования
переменных параметров.
Индикаторные микроорганизмы, используемые в производстве, как правило, более устойчивы к стери
лизации. чем типовая бионагрузка. Разработка цикла стерилизации должна включать демонстрацию этой
устойчивости. Могут также применяться следующие методы: изоляция, проращивание и оценка устойчивости
выявленных микроорганизмов бионагрузки или выдержка продукта с типовой бионагрузкой в коротких циклах
обработки с контролем стерильности продукта.
Число и устойчивость изолятов могут быть использованы для расчета легального эффекта процесса
применительно к бионагрузке. Однако проращивание микроорганизмов бионагрузки может изменить их
устойчивость. Если используются короткие циклы вылерживания. то они должны быть выбраны так. чтобы
позволить провести экстраполяцию результатов.
А.6.8 Метод абсолютной бионагрузки требует постоянного учета продукции и реализации программы
отслеживания устойчивости. Достаточные данные о бионагрузке должны быть получены путем использования
ранее полученных зарегистрированных данных. Частота оценки бнонагрузки зависит от качества и разброса
ранее полученных данных, вида стерилизуемых продуктов, процесса производства и типа процесса стерилиза
ции. При измерении производственной среды должен быть предусмотрен дополнительный контроль биона
грузки.
Устойчивость бионагрузки может быть определена выдержкой проб продукта, содержащего бионагрузку,
н последовательно увеличивающихся циклах установленного режима стерилизации и затем в передаче стериль
ных тестов для определения чиста выживших микроорганизмов или положительных проб, относящихся к
различным по длительности экспозициям |1|, |5|. Альтернативным методом определения устойчивости мик
роорганизмов бионагрузки может служить их изоляция и проращивание, последующая инокуляция на продукт
или соответствующий носитель, однако проращивание может изменить устойчивость бионагрузки. Также
15