ГОСТ Р 57130—2016
ности у грызунов. Кроме того, использование батарей тестов целесообразно, поскольку ни один тест
отдельно не способен выявить все генотоксические механизмы развития туморогенеза.
Общие характеристикистандартной батареи тестов:
i. Оценка мутагенности в виде теста обратной мутации бактерий. Данный тест позволяет выявить
соответствующие генетические изменения ибольшинство канцерогеновчеловека игрызуновс геноток
сическим потенциалом.
ii. Генотоксичностьтакжеследуетоцениватьвклетках млекопитающихinv/Ггои/или in Последую
щим образом.
Несколькосистем анализаклетокмлекопитающихin vitroширокоиспользуются имогут считаться в
достаточной степени валидированными. Анализ хромосомных аберраций в метафазе in vitro, микроя-
дерные пробы in vitro(примечание 1)и анализгенных мутаций клеток лимфомы мышей L5178Y Тк(тими-
димкиназы) (MLA). Данные три анализа в настоящее времясчитаютв одинаковой степени актуальными, а
следовательно, и взаимозаменяемыми при анализе повреждения хромосом при использовании в
сочетании с другими испытаниями генотоксичности в рамках стандартной батареи тестов лекарствен ных
средств, в случае если используются протоколы испытаний, представленных в настоящем
стандарте.
П р и м е ч а н и е 1
Микроядерная проба In vitro широко изучалась в рамках международных совместных исследований
(Klrsch-Volderset а!.. 2003). is validated by ECVAM (Corvietal.. 2008), и описана в руководстве ОЕС 487 (2010).
Испытания in vivo включены в батарею тестов, поскольку некоторые вещества показывают мута
генностьin vivo, но не in vitro (примечание 2). а также потому, что желательно включить анализы, учиты
вающие такиефакторы, как всасывание, распределение, метаболизм ивыведение. Поданной причине
также проведен выбор анализа микрочастиц в эритроцитах (в крови и костном мозге) или хромосомных
аберраций в клетках костногомозга вметафазе (примечание3). Лимфоциты, культивируемыеотживот
ных. получавших лечение, также могут использоваться для цитогенетического анализа, несмотря на
ограниченный опыт проведения подобного анализа.
П р и м е ч а н и е 2
Имеется небольшое, но значительное количество генотоксических канцерогенов, которые возможно
надежно выявить в анализах хромосомных поломок, но которые показали отрицательные/слабололожитель-
ные/сомнительные результаты в анализах in vitro в стандартной батарее. Канцерогены, такие каклрокарбазин.
гидрохинон, уретан и бензин, попадают в этукатегорию. Некоторые другие примеры, полученные по результа
там исследования, проведенного компаниями, описаны Tweats et at.. 2007. II.
П р и м е ч а н и е 3
В принципе, микроядра в гемопоэтических клетках можно исследовать на костном мозге любого биологи
ческого вида и в крови тех животных, которые не отфильтровывают циркулирующие микроядерныв эритроци
ты в селезенке. Улабораторных мышей микроядра измеряют в полихроматических эритроцитах крови, в при
терапии мышей продолжительностью А недели и более могут использоваться зрелые (нормохроматические)
эритроциты. Несмотря на то. что в организме крыс микроядерныв эритроциты быстро покидают кровоток,
было установлено, что в ретикулоцитах крови крыс обнаруживается микроядерная индукция, обусловленная
целым рядом кластогенов (Wakata eta).. 1998: Hamada etal.. 2001). Кровь крыс может использоваться для микро-
ядерного анализа, учитывая методы, используемые для обеспечения анализа вновь сформированныхретикупо-
цитов (Hayashl et al.. 2007: MacGregor et a).. 2006). при достаточно большом размере выборки для обеспечения
статистической чувствительности при более низком уровне микроядер в крови крыс, по сравнению с костным
мозгом (Kissllng etal.. 2007). Независимо от выбранного метода, анализа в костном мозге или вкрови, автомати
зированного или ручного анализа, каждая лаборатория должна устанавливать соответствующий размер
выборки для обеспечения уровня ошибки ниже уровня вариативности между животными.
В настоящее время имеется определенный опыт микроядерной индукции в организме собак и макак-резус
(Harper et al.. 2007; Hotchkiss etal.. 2008). Одним из примеров полезности данного альтернативного вида может
быть оценка метаболита человека, в недостаточной степени представленного у грызунов, но сформирован
ного у собак и макак.
Испытанияin vitroи in vivoдля оценки хромосомныхаберраций клетокв метафазе выявляютширо
кий спектр нарушений хромосомной целостности. Поломка хроматид или хромосом может привести к
формированию микроядер в случае образования ацентрического фрагмента, поэтому анализы, позво
ляющие определить хромосомные аберрации или микроядра, подходят для выявления кластогенов.
Микроядра могутобразоваться вследствиезадержки однойили несколькихцельныххромосом ванафа
зе. поэтомумикроядерныв пробыпотенциально позволяютопределитьнекоторые индукторыанеуплои-
дии. MLA позволяет выявить мутации гена Тк. обусловленные генными мутациями и
хромосомными
2