ГОСТ Р 57130—2016
5.4 Стратегии последующей разработки при получении положительных результатов
5.4.1 Последующая работа по результатам испытаний в клетках млекопитающих
In vitro
В следующем обсуждении представлены отрицательные результаты теста Эймса на бактериаль
ные мутации.
5.4.1.1 Последующ ие мсханист ическив/т vivo испыт ания
В случае недостаточного объема информации об отсутствии актуальности рекомендованные
последующиеиспытанияпри положительном результатеанализанаклеткахмлекопитающих необходи
мы для получения экспериментальных результатов в дополнительных исследований
in vitro
(см. i ниже)
или
за счет проведениядвух соответствующиханализов
in vivo
(см. пунктii ниже)следующим образом:
i. Механистическаяинформация, котораясвидетельствуетоботсутствиисовокупностиданныхоб
отсутствии актуальной генотоксичности
in vitro,
например, данные о том, что испытуемое вещество,
индуцирующее хромосомные аберрации или мутации в MLA. не поврехщает ДНК (например, другие
отрицательные результаты испытаний мутации/повреждения ДНК в дополнение к тесту Эймса; струк
турные аспекты), либо имеется свидетельство непрямого механизма, который может быть неактуаль
ным
in vivo
или иметь пороговое значение (например, подавление синтеза ДНК. реактивный кислород,
продуцируемый только в высоких концентрациях) (Galloway et al.. 1998; Scott et al., 1991; Muller and
Kasper, 2000). Сходные исследования могут использоваться для последующего анализа положитель
ных результатов в микроядерной пробе
in vitro,
либо вданном случае свидетельства включают извест
ный механизм, указывающий на потерю хромосом/анеуплоидию либо эксперименты по окрашиванию
центромеров (примечание 17). подтверждающие выпадение хромосомы. Полиплоидия — часто встре
чаемый результат анализов хромосомных аберраций
in vitro.
Несмотря на то. что анеугены способны к
индукции полиплоидии, толькополиплоидия не указываетнаанеугенный потенциал иможет свидетель
ствовать об отклонении клеточного цикла, и также часто характеризуется ростом цитотоксичности. В
случае полиплоидии в отсутствие структурной хромосомной поломки в анализе
in vitro
ii. Аналогичные исследования могут использоваться для отслеживания положительного резуль
тата микроядерногоанализа
in vitro
или в этом случае имеются свидетельства, включающие известный
механизм выявления хромосомной поломки/анеуплоидии либо эксперименты по окрашиванию (приме
чание 17). При проведении исследованийхромосомныхаберраций
in vitro
частообнаруживается полип
лоидия. Хотя анеугены способны индуцировать полиплоидию, сама по себе она не указывает на
анеугенный потенциал иможетпопростусвидетельствоватьо нарушенииклеточногоцикла, приэтомее
часто ассоциируют с ростом цитотоксичности. В случае полиплоидии, но при отсутствии структурных
хромосомных поломок в анализе
in vitro,
как правило, отрицательный результат микроядерной пробы
in vivo,
при условии соответствующего воздействия, дает достаточное подтверждение отсутствия
потенциала индукции анеуплоидии.
iii. Если вышеуказанная механистическая информация и совокупность имеющихся данных под
тверждает отсутствие генотоксичности. для подтверждения отсутствия генотоксической активности
используют лишь один анализ
in vivo,
при условии соответствующего воздействия. Как правило, речь
идето цитогенетическом анализе, амикроядерный анализ
in vivo
используютдлядальнейшиханализов
хромосомных поломок.
При отсутствии достаточных данных или механистической информации для исключения соотве
тствующего генотоксического потенциала, обычно проводят два испытания
in vivo
с соответствующими
конечными точками и в соответствующих тканях (обычнодве различные ткани) с целью достичьдоста
точнойстепени воздействия в моделях
in vivo.
Либо
iv. Проводятсядва соответствующих анализа
in vivo
с использованием разных тканей и подтвер
ждающих степень воздействия.
Таким образом, отрицательные результаты соответствующих анализов
in vivo
с достаточным
обоснованием измеряемых конечных точек и подтверждением степени воздействия (см. раздел 4.4.1)
считаютсядостаточнымидля подтверждения отсутствия значительного генотоксического риска.
П р и м е ч а н и е 17
Для того, чтобы определить, вызвана ли микроядерная индукция в первую очередь потерей хромосомы
либо поломкой хромосомы, микроядра могут быть окрашены In vitro либо in vivo для установления наличия цен
тромеров. например, в рамках анализа флуоресцентной гибридизации т situ (FISH) с зондами к последователь
ностям ДНК в цвнтромерном участке, либо меченым антителом к белкам, содержащим кинетохору. Если
большинство индуцированныхмикроядер содержат центромеры, это свидетельствует об утрате хромосомы
(следует учесть, что даже мощные яды трубочек, такие как колхицин и винбластин. продуцируют кинето-
15