ГОСТ Р 57130—2016
2000; 2007). Анализ хромосомных аберраций также можно провести в периферических лимфоцитах,
полученных от грызунов, получавшихтерапию (примечание 11).
П р и м е ч а н и е 11
В некоторых случаях полезно исследовать хромосомные аберрации в метафазе в лимфоцитах, взятых
от испытуемых животных после одного или нескольких введений исследуемого вещества, а также могут
использоваться клетки костного мозга в метафазе. Посколькулимфоциты циркулирующей крови не размножа
ются. предполагается, что вещества, требующие репликации для выявления генотоксического действия
(например. некоторые нуклеозидные аналоги), на должны выявляться в клетках данного типа. Поскольку неко
торые лимфоциты имеют достаточно высокую продолжительность жизни, в принципе, существует потенци
ал аккумуляции непарного повреждения ДНК т vivo, который может привести к аберрациям при стимуляции
деления клеток In vitro. Анализ лимфоцитов in vivo полезен при контроле показаний кластогенности. но в целом
другие ткани, такие какпечень, представляют собой более информативную замену теста микроядер в гемопо
этических клетках, поскольку концентрации препарата и метабопитов в печени зачастую выше.
4.2 Другие испытания гвнотоксичности in vivo
Аналогичные испытания in vivo, описанные в качестве второго испытания в рамках стандартного
набора тестов (вариант 2), могут использоваться в качестве контрольных испытаний для получения
необходимого набора данныхдля оценки результатов анализов in vitro или in vivo (примечания 11 и 12).
Несмотря нато. чтотип эффектов, наблюдаемыхin vitro, и знание механизма может помочь при выборе
анализа in vivo, проведение исследований хромосомных аберраций или генных мутаций эндогенных
генов в большинстве тканей нецелесообразно проводитьстандартными методами. Несмотря нато, что
мутации можно определять в трансгенах грызунов, это подразумевает более продолжительную тера
пию (например, в течение 28дней)для экспрессии, фиксации иаккумуляции мутаций, особенно в тканях с
медленноделящимися клетками(примечание 12). Такимобразом, во втором анализеin vivos качестве
суррогатнойконечной точки проводятоценку поврежденияДНК. Анализы с наиболее полным опублико
ванным опытом и рекомендациями в рамках протоколов включают анализы поломки нитей ДНК. в том
числе анализ единичной клетки методом гель-электрофорез («Кометный анализ») и анализ разрывов
ДНК. анализы трансгенныхмутаций на мышахin vivoианализы ковалентного связыванияДНК(любой из
которых может применяться во многих тканях, примечание 12). и анализ репаративного синтеза ДНК в
печени (анализ UDS).
П р и м е ч а н и е 12
Включение второго анализа т vivo в батарею тестов должно обеспечить отсутствие генотоксичности
за счет использования тканей, в которыхдостигаются высокие концентрации препарата и/или его метаболи
тов. небольшое число канцерогенов, предполагающих генотоксичность. обеспечили достижение положитель
ных результатов теста в печени, но имели отрицательный результат цитогенетического анализа in vivo
в костном .мозге. Эти примеры, вероятно, отражают отсутствие необходимой метаболической
активности либо отсутствие поступления реактивных промежуточных продуктов в гемопоэтические
клетки костного мозга.
Анализ разрывов нитей ДНК. ДНК-аддукты и мутации трансгенов имеют преимуществом возможность
использования во многих типах тканей. Протоколы, согласованные на международном уровне, пока не разрабо
таны для всех анализов In vivo,хотя существует достаточный опыт и опубликованные данные, ирекомендации
протокола в отношении анализов поломки нитей ДНК (кометный анализ и анализ методом щелочной элюции).
аддукт ДНК (ковалентное связывание) и анализа мутации на трансгенных грызунах, помимо анализа UDS. Для
вещества с положительным результатом анализа MLA in vitro и индуцирующего преимущественно крупные
колонии, а также не вызывающего поломку хромосом в мвтафазном анализе in vitro, вместо анализа разрыва
нитей ДНК следует рассмотреть анализ мутаций in vivo, например, анализ мутаций на трансгенных мышах.
Анализ UDS считается полезным, главным образом, для веществ, индуцирующихобъемные аддуктыДНК либо с
положительным результатом теста Эймса. Поскольку цитотоксичность провоцирует разрыв нитей ДНК, во
избежание искажения результатов анализа разрыва нитей ДНК следует лровести тщательную оценку цито
токсичности. Это явление хорошо описано в отношении теста методом щелочной элюции in vitro (Storeret al..
1996). при этом не полностью валидировано для кометного анализа. В принципе, анализ разрыва нитей ДНК
может применяться в рамках токсикологических исследований многократных доз с необходимым уровнем доз и
продолжительностью пробоотбора.
Поскольку печонь зрелыхживотных не отличается высокой митотической активностью, для
второгоанализа частоиспользуют не цитогенетическуюконечную точку, но при наличииделящих
ся гвпатоцитое. например, после частичной гепатэктомии. либо у молодых крыс (Hayashi et al..
2007). возмож!Ю проведение микроядврного анализа в печени, позволяющего выявить известные
гвнотоксичвскив вещества.
9