ГОСТ Р 57130—2016
- Salmonella typhimurium ТА100;
- Salmonella typhimurium TA1535;
- Salmonella typhimurium TA1537 или TA97, или TA97a;
- и Salmonella typhimurium TA102 или Escherichia coli WP2 uvrA. или Escherichia coli WP2 uvrA
(pKM101).
Одним из отличийот рекомендаций, изложенных вOECD и IWGT, является то. что по имеющемуся
опыту испытаний лекарственных средств, однократного теста Эймса оценки обратных бактериальных
мутацийдостаточно при определенноотрицательном или положительном результате, а также при усло
вии проведения испытания в полном соответствии с протоколом, включая все штаммы с метаболичес
кой активацией и без нее. соответствующий диапазон доз, удовлетворяющий критериям для выбора
максимальной дозы и соответствующий положительный и отрицательный контроль. Кроме того, при
испытании лекарственных средств как включение тарелки, так и метод предварительной инкубации
может быть целесообразендля данного однократного эксперимента (примечание 7). Спорные или сла
боположительные результаты могут указывать на целесообразность повторного проведения испыта
ния. возможно в рамках модифицированного протокола, например, с установлением соответствующих
интервалов между уровнямидоз.
П р и м е ч а н и е 7
Некоторые химические вещества проще выявить при помощи высевания в тарелки или методом предва
рительной инкубации несмотря на то. что различия носят обычно количественный, а не качественный харак
тер (Gatehouse etal.. 1994). Опыт в фармацевтической области, в рамках которого препараты изучали в рамках
обоих протоколов, не привели к получению разных результатов для двух методов, и в отчете IWG Т(Gatehouse
etal.. 1994) примеры химических классов, которые причислены к более просто определяемым в рамках протоко ла
лреинкубации. обычно не относятся к классулекарственных средств и показывают положительный резуль тат
в исследованиях генотоксичности in vivo. К ним относятся короткоцепочечные алифатические
нитрозамины. двухвалентные металлы, альдегиды (например, формальдегид, кротональдегид). азокрасители
(например, желтый краситель для масла), пирролизидиновые алкалоиды, аллилныв вещества (аллипизотиоци-
анат, аллилхлорид) и нитровещества (ароматические, алифатические).
3.3 Рекомендованные протоколы для проведения испытаний на клетках млекопитающих
Рекомендации попротоколам изложены в руководстве OECD (1997) ив публикациях IWGT(напри
мер. Kirsch-Volders et al., 2003: Moore et al., 2006). Также имеются рекомендации по интерпретации
результатов MLA (Moore et al.. 2006), включая применение глобального поправочного коэффициента.
Здесь приведены некоторые различияот приведенныхздесь рекомендаций при испытаниилекарствен
ных средств, вчастности, при выборе максимальной концентрации (см. подробности ниже).
3.3.1 Выбор максимальной концентрации
Максимальная концентрация
Максимально рекомендованная концентрация составляет 1 мМ или 0.5 мг/мл. в зависимости от
того, что ниже, при отсутствии ограничений, обусловленных растворимостью в растворителе или пита
тельнойсреде или цитотоксичностью (примечание 8).
П р и м е ч а н и е 8
Обоснование максимальной концентрации 1мМ для анализов в клетках млекопитающих in vitro включает
следующие компоненты. Батарея тестов включает тест Эймса и анализ in vivo. Данная батарея позволяет
оптимизировать определение генотоксических канцерогенов, не опираясь на результаты отдельных тестов.
Существует низкая вероятность того, что соответствующие вещества (канцерогены, повреждающие ДНК),
не выявляемые в тесте Эймса или анализе генотоксичности /п vivo, определимы в анализе в клетках
млекопи тающих т vitro в концентрациях более 1 мМ. Во-вторых, предельныйуровень 1 мМ позволяет
поддержать иден тификацию элемента риска выше клинического воздействия известных лекарственных
средств, включая вещества, концентрирующиеся в тканях (Goodman & Gilman. 2001). что также выше уровней,
обычно достигае мых в доклинических исследованиях in vivo.Подтверждено, что в случае некоторых
препаратов для достижения терапевтического эффекта требуются достаточно высокие клинические
концентрации. Хотя спонсорам может быть интересно сравнение активности с зарегистрированными
препаратами, возможно, даже свыше 1 мМ, для определения безопасности для человека наибольшую
актуальность имеют анализы in vivo.Для лека рственных средств с нестандартно низкой молекулярной
массой (например, менее 200) следует рассмотреть возможность достижения более высоких концентраций
исследуемого препарата.
Пределрастворимости
В случае ограничивающиххарактеристикрастворимости максимальной концентрацией, при усло
вииограничения состороны цитотоксичности, должна быть наиболее низкаяконцентрация, прикоторой в
культурах присутствует минимальный осадок, при условии отсутствия побочного влияния нарасшиф-
6