ГОСТ Р 57130—2016
снижения роста было устаноелено. что частота положительных результатов для веществ без мутагенного
или канцерогенного потенциала снижена, в то время как вещества, действующие за счет прямого взаимодвй-
ствиясДНК. обеспечивают надежные положительные результаты.
3.3.2 Дизайн исследования/Протоколы испытаний
В целях цитогенетической оценки повреждений хромосом в клетках метафазы in vitro, протокол
испытания должен включать проведение испытаний с метаболической активацией и без, с использова
нием соответствующего положительного и отрицательного контроля. Терапия исследуемыми препара
тамидолжна иметь продолжительностьот3 до 6часов, а время пробоотборадолжно приблизительно в
1,5 раза превышать обычный клеточный цикл от начала терапии. Непрерывная терапия без метаболи
ческой активации продолжительностью, приблизительно в 1.5 раза превышающей нормальный клеточ
ный цикл, должна проводиться при получении отрицательных или сомнительных результатов обоих
цикловкраткосрочнойтерапиис метаболическойактивациейибез нее. Аналогичные принципы распрос
траняются на микроядерную пробуin vitro, стем отличием, чтовремя пробоотбора, как правило, состав
ляет 1,5—2 нормальных клеточных цикла от начала терапии, чтобы обеспечить возможность полного
прохождения клетками митоза и вхождения в следующую интерфазу. Для обоих цитогенетических ана
лизовin vitroможетпотребоватьсямодификация протоколакопределеннымтипамхимическихвеществ,
которые проще определить при более длительной терапии, отсрочивании пробоотбора или периода
восстановления, например, некоторыенуклеозидныеаналогии некоторыенитрозамины. Вметафаэном
анализе аберраций информацию о плоидическом статусе получают за счет регистрации частот полип
лоидных (включая эндоредуплицированные) метафаз в виде процентаотчисла клетокв метафазе. Для
MLA протоколиспытаниядолжен включатьпроведениеиспытанийс метаболическойактивациейи без с
соответствующим положительным и отрицательным контролем при продолжительноститерапиииссле
дуемым препаратом 3—4 часа. Длительная терапия без метаболической активации продолжительнос
тью около 24 часов должна проводиться в случае получения отрицательного или сомнительного
результатаобоих краткосрочных циклов терапии сметаболической активацией и без нее. Стандартный
MLAдолжен включать(i)положительныйконтроль, индуцирующий, главным образом, малые колонии, и
(ii)изменение размера колонийдля положительного контроля, контрольрастворителей и минимумодну
положительную концентрацию исследуемого компонента (при наличии), включая культуру,
характеризующуюся наибольшейчастотой выявления мутаций.
Для исследований на клетках млекопитающих in vitro должны использоваться встроенные под
тверждающие элементы, подобные перечисленным выше (например, различная продолжительность
терапии, тесты с метаболической активацией и без нее). После подобных анализов дальнейшие под
тверждающие испытания в случае получения определенно отрицательныхили положительных резуль
татов. как правило, не требуются. При получении сомнительных или слабоположительных результатов
могутпотребоватьсяповторныетесты, возможно, врамкахмодифицированногопротокола, например, с
установлением иных интервалов исследуемых концентраций.
3.3.3 Положительный контроль
Одновременное проведениетестовнаположительныхконтрольныхобразцахважно,однакотесты
на клетках млекопитающих с целью выявления генетической токсичности в достаточной степени стан
дартизированы. так что использование положительных контрольных образцов обычно ограничивается
использованием ихв случае метаболической активации (при одновременном проведениистестами без
активации) с целью продемонстрировать активность системы метаболической активации и
восприимчивости тест-системы.
4 Рекомендации по проведению испытаний in vivo
4.1 Тесты, проводимые с целью определения хромосомных повреждений In vivo
Для определения кластогенов подходит либо анализ хромосомных аберраций, либо измерение
микроядерных полихроматических эритроцитов в костном мозге in vivo. Для проведения микроядерной
пробы в костном мозге в качестве модели подходят и крысы, и мыши. Микроядра также можно исследо
вать в незрелых (например, полихроматических) эритроцитах в периферической крови мышей либо в
новообразованных ретикулоцитах в крови крыс (примечание 3). Аналогичным образом также могут
использоватьсянезрелыеэритроцитыживотныхлюбогодругого вида, характеризующиесяаналогичной
чувствительностью к определению индукторов кластогенов/анеуплоидии в костном мозге или перифе
рической крови (примечание 3). При условии надлежащей валидации могут использоваться системы
автоматизированногоанализа (визуальныйанализ ипроточнаяцитометрия) (OECD. 1997; Hayashietal.,
8