ГОСТ Р 57130—2016
хор-положительныв микроядра не в 100%. а чаще в 70—80 % и являются основными анеугенами для оценки рис ка).
Альтернативный подход заключается в проведении анализа /п vitro или In vivo структурных аберраций в
метафазе. В случае отрицательного результата можно предположить, что индукция микроядер связана с
утратой хромосом.
5.4.1.2 Дальнейшие анализы после получения положительного результата анализа in vitro, в
зависимости от активации S9
В случае, когда положительные результаты наблюдаются только в присутствии системы актива
ции S9. вначале следует подтвердить, чтоэтот результатдостигнуттолько вследствие метаболической
активации, ане иных различий в условиях (например, низкий уровень или отсутствие сыворотки в миксе
S9и>10 % сывороткив неактивированныхкультурах). Вэтом случав стратегия последующихиспытаний
направлена на определение соответствия результатов исследованийin vitroусловиям in vivoи главным
образом будетопираться на результаты анализов in vivo в печени (примечание 18).
П р и м е ч а н и е ^
Стандартный индуцированный микс S9 имеет более высокие возможности к активации, чем S9 человека,
при этом в нем отсутствует способность к детоксификации во второй фазе, за исключением случаев воздей
ствия специфических кофакторов. Кроме того, неспецифическая активация может возникнуть in vitro при
высоких концентрациях субстрата (см. KirMand et at.. 2007). Полезными могут оказаться испытания геноток-
сичности S9 человека либо других релевантных систем активации. Анализ профиля метаболитов в рамках
испытаний генотоксичности по сравнению с известными профилями метаболитов в доклиническом виде (либо в
неиндуцированных микросомах либо гепатоцитвх. либо In vivo) или в препаратах, полученных от человека,
также может помочь определить актуальность результатов испытания (Ки et а!.. 2007). а последующие иссле
дования сконцентрируются на исследованиях в печени In vivo. Вещество, для которого были достигнуты поло
жительные результаты In vitro для S9. могут не вызывать генотоксичности in vivo, поскольку метаболит не
формируется, формируется в очень малых количествахлибо метаболически детоксифицирован, либо быстро
выводится, что свидетельствует об отсутствии риска in vivo.
5.4.2 Дальнейшие анализы в случае положительной микроядерной пробы in vivo
В случав увеличениячисла микроядерin wyoследуетпровестиоценкувсехтоксикологическихдан
ных для установления вероятности того, что основной причиной или сопутствующим фактором может
быть негенотоксический эффект (примечание 15). В случае неспецифических эффектов нарушения
эритропоэза или физиологии (например, гипо/гилертермия) болеецелесообразным можетстать анализ
хромосомных аберраций in vivo. При подозрении на «реальный» рост следует использовать стратегии,
показывающие на обусловленность роста выпадением либо поломкой хромосом (примечание 17). Име
ются свидетельства того, что индукция анеуплоидии, например веретенными ядами, приводит к нели
нейному эффектудозы. Следовательно, возможноустановить пороговую концентрацию, ниже которой
не предполагается выпадения хромосом, и установить наличие соответствующего коэффициента
надежности, по сравнению с клиническими концентрациями.
Таким образом, оценка генотоксического потенциала вещества должна учитывать всю совокуп
ностьполученныхданных и учитываетпользу иограничения анализов in vitroи in vivo.
5.5 Последующий анализ генотоксичности применительно к результатам опухолевого
роста в биологическом анализе канцерогенности
Дополнительные анализы генотоксичности в соответствующих моделях могут проводиться для
веществ, показавшихотрицательныйрезультатв рамкахстандартной батареи тестов, но при этомпока
завших опухолевый рост в биологических анализах канцерогенности при недостаточности свиде
тельств. подтверждающих негенотоксический механизм развития опухоли. Чтобы лучше понять способ
действия,дополнительные анализы могутвключатьмодифицированныеусловия метаболическойакти
вации в испытаниях in vitroили включать анализы in vivo с целью определения генетического поврежде
нияв целевыхорганахопухоли, например, анализразрыванитейДНК (например, кометныйанализлибо
анализметодом щелочнойэлюции), анализUDSв печени, анализковалентногосвязыванияДНК(напри
мер, с последующей меткой 32Р), индукция мутаций в трансгенах либо молекулярная характеристика
генетических изменений генов, связанныхс опухолью (Kasper et al„ 2007).
6 Термины
Аддукт ДНК (DNA edduct)
Продукт ковалентного связывания химического вещества с ДНК
Анализ ДНК методом щелочной
элюции (Alkaline elution assay)
См. анализ разрыва нитей ДНК
16