ГОСТ Р 57130—2016
полихроматическихэритроцитов (ПХЭ) либо ретикулоцитов). интервалмеждуучитываемымидозы дол
жен быть не более чем в 2 раза ниже максимальной цитотоксической дозы. Если подходящие дозы не
включены в исследование продолжительностью несколько недель, дополнительные данные могут
помочьвыявитьанеугены инекоторые токсичные кластогены любым из следующихспособов:
i. По мере увеличения продолжительности терапии при выраженном нарастании токсичности
рекомендованораннеевзятиеобразцов крови(на3— 4-й день). Например, если в микроядерной пробе в
рамках многонедельногоанализа используется кровь или костный мозг иретикулоциты классифициру
ют. выраженная гематотоксичность может повлиять на способность к выявлению микроядер. т. е. доза,
индуцирующаяопределимый ростмикроядерпослеоднократного введения, можетбытьчрезмерноток
сичной в случае анализа при многократном введении (Hamada et al.. 2001). Ранние образцы могут
использоватьсядляобеспечениявыявлениякластогеновипотенциальныханеугенов
(см. примечания 14 и 15).
ii. Микроядерная проба в клетках млекопитающихin vitro.
iii. Микроядерная проба в костном мозге при однократном введении.
П р и м е ч а н и е 14
Необходимо с осторожностью подходить к токсикологическим исслодоеаниям. включающим
взятие дополнительных образцов крови, например, для определения концентраций. Кровотечение
можетпривестик искажениюрезультатовмикроядерногоанализа, посколькуэритропоэз. стимули
руемый взятиемкрови, может спровоцироватьрост числа микроядврных эритроцитов.
П р и м е ч а н и е 15
Рост числа микроядер может произойти и без введения гемотоксического агента вследствие нарушения
эритропоэза (например, регенеративная анемия, экстрамедуллярный гемопоэз, стресс и гипо- и гепертермия
(анализ Tweats etal.. 2007.1)). В крови изменение функции селезенки, влияющее на клиренс микроядврных клеток из
крови, могло привести к незначительномуросту циркулирующих микроядврных эритроцитов.
4.4 Демонстрация концентраций в целевых тканях при отрицательных результатах
анализов in vivo
Исследования in vivo играют важную роль в разработке стратегии исследований генотоксичности.
Ценность результатов исследований in vivo напрямую связана с подтверждением достаточной концен
трации испытуемого вещества в целевой ткани. Это особенно актуально при получении отрицательных
результатов анализа in vivo, если испытания in vitro убедительно доказали наличие генотоксичных
свойств или в случае, если не проводится анализ на клетках млекопитающих in vitro. Доказательством
достаточной концентрации могут быть признаки токсичности в исследуемой ткани либо токсикокинети-
ческиеданные, представленные в следующем разделе.
4.4.1 В случае положительного результата испытания генотоксичности in vitro
(или если исследование не проводилось)
Оценка концентраций, достигнутых in vivo, должна проводиться при максимальной дозе или при
других релевантных дозах на животных того же вида, линии и при аналогичном пути дозирования,
используемого в рамках анализа генотоксичности. В случае, если оценку генотоксичности проводят в
рамках токсикологических анализов, информация о концентрациях обычно доступна в рамках токсико
логической оценки.
Оценка концентрацииin vivoможетпроводиться по одному из следующих методов:
i. Цитотоксичность:
a. Для цитогенетических анализов: За счет достижения существенного изменения пропорции
незрелых эритроцитов в числе общего пула эритроцитов в целевой ткани (костный мозг или кровь) в
дозах и при времени пробоотбора в рамках микроядерной пробы или за счет измерения значительного
снижения митотического индекса в рамках анализа хромосомныхаберраций.
b
. Для других анализов генотоксичности in vivo: Токсичность в печени или изучаемых тканях,
например, методом гистопатологическойоценки или индикаторовтоксичности попоказателямбиохими
ческого анализа крови.
ii. Воздействие препарата:
a. Измерение материала препарата в крови и плазме. Ткани костного мозга характеризуются
высокой перфузией, а уровеньлекарственного материала в крови или плазме в целом аналогичен тако му
в костном мозге. Предполагается, что системное воздействие препаратов на печень наблюдается
независимоот пути введения.
b
. Прямое измерение материала, связанного с препаратом, вцелевыхтканях, либо ауторадиогра
фическая оценка тканевых концентраций.
и