ГОСТ Р 55992.2—2014
целью выявления новорожденных с врожденной гиперплазией надпочечников, которая является причи
ной развития адреногенитального синдрома. Вследствие врожденного дефекта ферментов 21-гидрок-
силазы (почти 80 % всех случаев) и 11Ц-гидроксилазы (около 15 % всех случаев) нарушается синтез
кортизола, который осуществляется под их действием.
17ы-гидроксипрогестерон является предшественником кортизола в биосинтезе и накапливается
при дефиците данных ферментов. Недостаточная продукция кортизола, вызывает повышение секре
ции АКТГ и андрогенов. Развивается гиперплазия коры надпочечников, которая является следствием
нарушения активности данных двух гидроксилаз. Надпочечники в большом количестве секретируют
стероиды, предшествующие блоку ферментов — прогестерон и 17а-гидроксипрогестерон.
Как метаболит прогестерона. 17а-гидроксипрогестерон образуется и в плаценте, поэтому концен
трация его у здоровых новорожденных тотчас после рождения высока. В первые же дни жизни у всех
здоровых новорожденных она быстро уменьшается.
Измерение 17а-гидроксипрогестерона при неонатальном скрининге является полезным тестом
для выявления двух наиболее частых типов адреногенитального синдрома — при дефиците 21-гидрок-
силазы и 11^гидроксилазы, то есть около 95 % всех случаев врожденной гиперплазии надпочечников и
адреногенитальногосиндрома. Проведение неонатальногоскрининга на врожденную гиперплазию над
почечников с измерением в «сухих пятнах» крови новорожденных 17«-гидроксипрогестерона позволяет
диагностировать заболевание на ранних стадиях, своевременно начать лечение для снижения ранней
младенческой смертности и предотвращения развития адреногенитального синдрома.
5.3.3.2 Принцип метода
Метод основан на твердофазном конкурентном иммунофлюоресцентном анализе. Конкуренция
создается между 17а-гидроксипрогестероном. меченным европием, и 17«-гидроксипрогестероном об
разца за ограниченное число мест связывания на специфических, по отношению к 17а-гидроксипрогес-
терону, антителах. Вторые антивидовые антитела, нанесенные на твердую фазу, позволяют
адсорбировать специфические антитела, связавшие 17а-гидроксипрогестерон из пробы и в виде конъ
югата с меткой Ей. После промывки и удаления непрореагировавших компонентов добавляют раствор,
усиливающий флюоресценцию хелатов европия. Последний переводит ионы европия из комплекса ан
тител с конъюгатом 17а-гидроксипрогестерона с твердой фазы в раствор, образуя сильно флюоресци
рующие хелаты. Концентрация Еи обратно пропорциональна концентрации искомого аналита —
17а-гидроксипрогестерона в пробах.
5.3.3.3 Спектрально-люминесцентные характеристики
Интенсивность флюоресценции ионов европия в составе хелатирующих бета-дикетонатных ком
плексов усиливающего раствора должна регистрироваться на планшетном флуорометре в режиме
флюоресценции с временным разрешением. Максимальнаядлина волны возбуждающего света 340 нм.
максимальная длина волны испускания 615 нм.
5.3.3.4 Первичные образцы для анализа
Непосредственное определение должно проводиться в дисках диаметром 3,2 мм. которые выби
ваются с помощью специального устройства — инструмента для выбивания дисков из «сухих пятен»
крови новорожденных на тест-бланках фильтровальной бумаги марки Whatman 903 или аналогичной по
своим свойствам. См. подраздел 4.4 ГОСТ Р 55992.1.
5.3.3.5 Количество определений
Один набор должен быть рассчитан на 960 определений.
5.3.3.6 Компоненты набора
В состав набора должны входить:
- калибраторы 17«-гидроксипрогестерона с аттестованными его концентрациями — не менее 6
уровней концентрации;
П р и м е ч а н и я
1 Значения концентрации 17а-гидроксипрогестерона . количество калибраторов, срок годности и условия
хранения должны быть указаны в инструкции к набору. Точные значения концентрации должны быть указаны в кон
трольном сертификате (сертификате качества>. прилагаемом к набору, и на этикетках на калибраторах.
2 Изготовитель должен представить информацию о методах аттестации значений концентрации 17и-гидрок-
сипрогестерона в калибровочных материалах:
3 Измерения калибровочных образцов должны проводиться с каждой серией образцов пациентов. Калибро
вочные пробы каждой концентрации измеряются в дубликатах;
15